Eencellige transcriptoomidentificatie van UV- en zichtbaar licht-geïnduceerde genen in menselijke melanocyten in vivo (melatrans)

Medische toestand en pathologie bestudeerden huidpigmentatie. Rechtvaardiging / reden voor het onderzoek UV is zowel de fysiologische stimulans voor huidpigmentatie als de belangrijkste etiologische factor bij melanoom. Onlangs is ook beschreven dat zichtbaar (blauw) licht huidpigmentatie veroorzaakt, zonder enig duidelijk procarcinogeen effect. Er zijn studies uitgevoerd om door UV in melanocyten geïnduceerde genen te identificeren en om de mechanismen te begrijpen die verantwoordelijk zijn voor door licht veroorzaakte huidpigmentatie. De zeldzaamheid van deze cellen in de epidermis (3% van de cellen) is tot nu toe echter een onoverkomelijk obstakel geweest om dit doel te bereiken. Hetzelfde geldt voor zichtbaar licht, waarvoor de gegevens nog fragmentarischer zijn. De komst van transcriptoomanalysetechnieken op het niveau van een enkele cel of enkele kern zal ons in staat stellen dit obstakel te overwinnen en de transcriptionele effecten van UV en blauw licht in melanocyten in situ te identificeren, evenals in andere huidcellen (keratinocyten, fibroblasten). Het begrijpen van de moleculaire mechanismen die door UV en blauw licht in melanocyten en andere cellen worden gereguleerd, zal nieuwe belangrijke stappen in huidpigmentatie onthullen. De gegevens van ons onderzoek zullen worden gebruikt om nieuwe fotoprotectieve middelen te ontwikkelen, evenals nieuwe behandelingen voor pigmentaire pathologieën. Primaire doelstelling Beschrijf de variaties in genexpressie veroorzaakt door ultraviolette (UV) straling van de zon of blauw licht in menselijke melanocyten in vivo. Secundaire doelstellingen Beschrijf de variaties in genexpressie veroorzaakt door ultraviolette (UV) straling, zonlicht of blauw licht in andere huidcellen. Beoordelingscriteria Single cell transcriptome analysis Immunolabeling op huidcoupes Populatie en aantal insluitsels Gezonde mannelijke vrijwilligers, fototype III op de Fitzpatrick-schaal, leeftijd 25 + 5 jaar en vergelijkbare zwaarlijvigheid (body mass index tussen 20 en 28). 2 inclusies Duur van de studie Totale duur van de studie: 12 maanden Duur van de inclusiefase: 1 maand Duur van deelname voor een patiënt: 11 dagen Methodologie Twee gezonde vrijwilligers zullen worden blootgesteld aan UV of zichtbaar licht in de onderarm. Zuigblaren en huidbiopten zullen worden uitgevoerd in de testgebieden, zuigbellen voor transcriptoom, biopsieën voor immunohistochemie. De studie van genexpressie in de verschillende celtypes zal gebeuren door middel van RNA-Seq op afzonderlijke cellen, met behulp van de 10X genomics-benadering. Tenslotte zal een validatie van de resultaten worden uitgevoerd door middel van immunokleuring met specifieke antilichamen of RNA-Scope. Verloop van het onderzoek - Dag 1: Het onderzoek begint met de bepaling van de minimale erytheemdosis (MED) voor elke proefpersoon in het gebied van de onderarmen. Deze bepaling zal worden uitgevoerd door middel van de toediening van zes verschillende doses in oplopende stappen van 25% UVB + UVA-stralen (gesimuleerd zonne-ultraviolet spectrum) op zes geselecteerde testgebieden (elk 1,3 cm²). Blootgestelde gebieden worden 24 + 2 uur na blootstelling op dag 2 beoordeeld, erytheem wordt beoordeeld op dag 2: aflezing van de DEM en bestralingen op twee zones in het gebied van de onderarmen met respectievelijk een dosis van 2 DEM UV en 48J/ cm2 in zichtbaar licht. Een derde niet-bestraald gebied dient als controle. Dag 3: Een huidblaar en biopsie worden uitgevoerd op elk van de drie testgebieden. Cellen verzameld in de blistervloeistof zullen worden gebruikt voor het transcriptoom en biopsieën voor validatie door immunohistochemie. Dag 11: De proefpersonen zullen acht dagen na de dag van bemonstering opnieuw worden gezien, d.w.z. op dag 11 voor het verwijderen van hechtingen en het bewaken van de genezing. Op dezelfde dag zal een evaluatie van het niveau van UV-pigmentatie veroorzaakt op elk testgebied visueel en door middel van colorimetrie worden uitgevoerd.