Jednobuněčná transkriptomová identifikace genů indukovaných UV a viditelným světlem v lidských melanocytech in vivo (melatrans)

Zdravotní stav a patologie zkoumaly pigmentaci kůže. Odůvodnění / zdůvodnění studie UV záření je jak fyziologickým stimulem pro pigmentaci kůže, tak hlavním etiologickým faktorem melanomu. Nedávno bylo také popsáno, že viditelné (modré) světlo vyvolává pigmentaci kůže, bez zjevného prokarcinogenního účinku. Byly provedeny studie s cílem identifikovat geny indukované UV zářením v melanocytech a pochopit mechanismy odpovědné za fotoindukovanou pigmentaci kůže. Vzácnost těchto buněk v epidermis (3 % buněk) však byla dosud nepřekonatelnou překážkou k dosažení tohoto cíle. Totéž platí pro viditelné světlo, u kterého jsou údaje ještě nejednotnější. Nástup technik analýzy transkriptomu na úrovni jedné buňky nebo jednoho jádra nám umožní překonat tuto překážku a identifikovat transkripční účinky UV a modrého světla v melanocytech in-situ, stejně jako v jiných kožních buňkách (keratinocyty, fibroblasty). Pochopení molekulárních mechanismů regulovaných UV a modrým světlem v melanocytech a dalších buňkách odhalí nové klíčové kroky v pigmentaci kůže. Data z naší studie budou použita k vývoji nových fotoprotektivních látek a také nových léčebných postupů pro pigmentové patologie. Primární cíl Popište variace v genové expresi indukované slunečním ultrafialovým (UV) zářením nebo modrým světlem v lidských melanocytech in vivo. Sekundární cíle Popište variace v genové expresi indukované ultrafialovým (UV) zářením, slunečním zářením nebo modrým světlem v jiných kožních buňkách. Kritéria hodnocení Jednobuněčná transkriptomová analýza Imunooznačení na kožních řezech Populace a počet inkluzí Zdraví mužští dobrovolníci, fototyp III na Fitzpatrickově stupnici, věk 25 + 5 let a s podobnou korpulencí (index tělesné hmotnosti mezi 20 a 28). 2 inkluze Délka studie Celková doba trvání studie: 12 měsíců Délka inkluzní fáze: 1 měsíc Délka účasti pro pacienta: 11 dní Metodika Dva zdraví dobrovolníci budou vystaveni UV nebo viditelnému světlu v oblasti předloktí. V testovacích oblastech budou prováděny odsávací puchýře a kožní biopsie, odsávací bubliny pro transkriptom, biopsie pro imunohistochemii. Studium genové exprese v různých typech buněk bude provedeno pomocí RNA-Seq na jednotlivých buňkách za použití 10X genomického přístupu. Nakonec bude provedena validace výsledků imunobarvením se specifickými protilátkami nebo RNA-Scope. Průběh studie - Den 1: Studie začíná stanovením minimální erytémové dávky (MED) pro každého pacienta v oblasti předloktí. Toto stanovení bude provedeno podáváním šesti různých dávek ve zvyšujících se stupních 25 % UVB + UVA paprsků (simulované sluneční ultrafialové spektrum) na šesti vybraných testovacích plochách (každá 1,3 cm²). Exponované oblasti budou hodnoceny 24 + 2 hodiny po expozici v den 2, erytém bude hodnocen. cm2 ve viditelném světle. Třetí neozářená oblast bude sloužit jako kontrola. Den 3: Na každé ze tří testovacích oblastí se provede kožní puchýř a biopsie. Buňky odebrané v tekutině z blistru budou použity pro transkriptom a biopsie pro validaci imunohistochemií. Den 11: Subjekty budou znovu viděny osm dní po dni odběru vzorků, tj. v den 11 pro odstranění stehů a sledování hojení. Ve stejný den se vizuálně a kolorimetricky vyhodnotí hladina UV pigmentace indukované na každé testovací ploše.