Encellet transkriptomidentifikasjon av UV- og synliglysinduserte gener i humane melanocytter in vivo (melatrans)

Medisinsk tilstand og patologi studerte hudpigmentering. Begrunnelse / begrunnelse for studien UV er både den fysiologiske stimulansen for hudpigmentering og den viktigste etiologiske faktoren ved melanom. Nylig har synlig (blått) lys også blitt beskrevet for å indusere hudpigmentering, uten noen åpenbar pro-kreftfremkallende effekt. Det er utført studier for å identifisere gener indusert av UV i melanocytter og for å forstå mekanismene som er ansvarlige for fotoindusert hudpigmentering. Imidlertid har sjeldenhetene til disse cellene i epidermis (3 % av cellene) så langt vært en uoverkommelig hindring for å nå dette målet. Det samme gjelder for synlig lys, hvor dataene er enda mer usammenhengende. Fremkomsten av transkriptomanalyseteknikker på enkeltcelle- eller enkeltkjernenivå vil tillate oss å overvinne denne hindringen og identifisere de transkripsjonelle effektene av UV og blått lys i melanocytter in-situ, så vel som i andre hudceller (keratinocytter, fibroblaster). Å forstå de molekylære mekanismene som reguleres av UV og blått lys i melanocytter og andre celler vil avsløre nye nøkkeltrinn i hudpigmentering. Dataene fra vår studie vil bli brukt til å utvikle nye fotobeskyttende midler samt nye behandlinger for pigmentpatologier. Primært mål Beskriv variasjonene i genuttrykk indusert av ultrafiolett (UV) solstråling eller blått lys i humane melanocytter in vivo. Sekundære mål Beskriv variasjonene i genuttrykk indusert av ultrafiolett (UV) stråling sollys eller blått lys i andre hudceller. Evalueringskriterier Enkeltcellet transkriptomanalyse Immunmerking på hudsnitt Populasjon og antall inklusjoner Friske mannlige frivillige, fototype III på Fitzpatrick-skalaen, alder 25 + 5 år og med tilsvarende korpulens (kroppsmasseindeks mellom 20 og 28). 2 inklusjoner Studiens varighet Total varighet av studien: 12 måneder Varighet av inklusjonsfasen: 1 måned Varighet av deltakelse for en pasient: 11 dager Metodikk To friske frivillige vil bli eksponert for UV eller synlig lys i underarmsregionen. Det vil bli utført sugeblemmer og hudbiopsier i testområdene, sugebobler for transkriptom, biopsier for immunhistokjemi. Studiet av genuttrykk i de forskjellige celletypene vil bli gjort ved hjelp av RNA-Seq på enkeltceller, ved bruk av 10X genomikk-tilnærmingen. Til slutt vil en validering av resultatene bli utført ved immunfarging med spesifikke antistoffer eller RNA-Scope. Studieforløp - Dag 1: Studien begynner med fastsettelse av minimum erytemdose (MED) for hvert individ i underarmens område. Denne bestemmelsen vil bli utført ved hjelp av administrering av seks forskjellige doser i økende stadier på 25 % av UVB + UVA-stråler (simulert solar ultrafiolett spektrum) på seks utvalgte testområder (hver 1,3 cm²). Eksponerte områder vil bli vurdert 24 + 2 timer etter eksponering på dag 2, erytem vil bli vurdert Dag 2: Avlesning av DEM, og bestråling på to soner i regionen underarmer med henholdsvis en dose på 2 DEM UV, og 48J/ cm2 i synlig lys. Et tredje ikke-bestrålt område vil tjene som kontroll. Dag 3: En hudblemme og biopsi vil bli utført på hvert av de tre testområdene. Celler samlet i blemmevæsken vil bli brukt til transkriptomet og biopsier for validering ved immunhistokjemi. Dag 11: Forsøkspersonene vil bli sett igjen åtte dager etter prøvetakingsdagen, dvs. på dag 11 for fjerning av suturer og overvåking av tilheling. Samme dag vil en evaluering av nivået av UV-pigmentering indusert på hvert testområde bli utført visuelt og ved kolorimetri.