UV- és látható fény által indukált gének egysejtű transzkriptom azonosítása humán melanocitákban in vivo (melatrans)

Az egészségügyi állapot és a patológia a bőr pigmentációját vizsgálta. A vizsgálat indoklása/indoklása Az UV a bőr pigmentációjának fiziológiai ingere és a melanoma fő etiológiai tényezője. A közelmúltban a látható (kék) fényről is leírták, hogy bőrpigmentációt vált ki, anélkül, hogy nyilvánvaló pro-karcinogén hatása lenne. Tanulmányokat végeztek az UV-sugárzás által indukált gének azonosítására melanocitákban, valamint a fotoindukált bőrpigmentációért felelős mechanizmusok megértésére. Azonban ezen sejtek ritkasága az epidermiszben (a sejtek 3%-a) eddig leküzdhetetlen akadályt jelentett e cél elérésében. Ugyanez igaz a látható fényre is, amelynél az adatok még foltosabbak. A transzkriptomelemző technikák megjelenése az egysejt vagy egymag szintjén lehetővé teszi számunkra, hogy leküzdjük ezt az akadályt, és azonosítsuk az UV és kék fény transzkripciós hatásait a melanocitákban in situ, valamint más bőrsejtekben (keratinocitákban, fibroblasztokban). Az UV és kék fény által szabályozott molekuláris mechanizmusok megértése a melanocitákban és más sejtekben új kulcsfontosságú lépéseket tár fel a bőr pigmentációjában. Tanulmányunk adatait új fényvédő szerek, valamint pigmentpatológiák kezelésére szolgáló új kezelések kifejlesztésére használjuk fel. Elsődleges cél Mutassa be a nap ultraibolya (UV) sugárzása vagy kék fény által indukált génexpresszió változásait humán melanocitákban in vivo. Másodlagos célok Ismertesse a génexpresszió változásait, amelyeket az ultraibolya (UV) sugárzás napfény vagy kék fény okoz más bőrsejtekben. Értékelési kritériumok Egysejtes transzkriptom analízis Immunjelölés a bőrmetszeteken Populáció és zárványok száma Egészséges férfi önkéntesek, a Fitzpatrick-skála szerinti III. fototípusúak, életkoruk 25 + 5 év és hasonló testtömegű (testtömegindex 20 és 28 között). 2 zárvány A vizsgálat időtartama A vizsgálat teljes időtartama: 12 hónap A bevonási szakasz időtartama: 1 hónap Egy beteg részvételének időtartama: 11 nap Módszertan Két egészséges önkéntest UV vagy látható fénynek tesznek ki az alkar területén. Szívóhólyagok és bőrbiopsziák készülnek a vizsgálati területeken, szívóbuborékok a transzkriptumhoz, biopsziák az immunhisztokémiához. A génexpresszió tanulmányozását a különböző sejttípusokban az RNS-Seq-vel végzik egyedi sejteken, a 10X genomikai megközelítést alkalmazva. Végül az eredmények validálása specifikus antitestekkel vagy RNS-Scope-pal végzett immunfestéssel történik. A vizsgálat menete – 1. nap: A vizsgálat a Minimális Erythemal Dózis (MED) meghatározásával kezdődik minden egyes alanynál az alkar régiójában. Ez a meghatározás hat különböző dózis beadásával történik, az UVB + UVA sugarak 25%-os növekvő szakaszában (szimulált szoláris ultraibolya spektrum) hat kiválasztott vizsgálati területen (mindegyik 1,3 cm²). A kitett területeket 24 + 2 órával az expozíció után a 2. napon, a bőrpírt 2. napon értékelik: DEM leolvasása, és az alkar régiójában lévő két zóna besugárzása 2 DEM UV, illetve 48 J/ cm2 látható fényben. Egy harmadik, nem besugárzott terület fog kontrollként szolgálni. 3. nap: Bőrhólyagot és biopsziát végeznek mind a három vizsgálati területen. A bliszterfolyadékban összegyűjtött sejteket a transzkriptomhoz és a biopsziához használjuk fel az immunhisztokémiai validáláshoz. 11. nap: Az alanyokat a mintavétel napját követő nyolc napon belül ismét meglátogatják, azaz a 11. napon a varratok eltávolítása és a gyógyulás monitorozása céljából. Ugyanazon a napon minden vizsgálati területen vizuálisan és kolorimetriával értékelik az UV-pigmentáció szintjét.