UV- ja näkyvän valon aiheuttamien geenien yksisoluinen transkriptiotunniste ihmisen melanosyyteissä in vivo (melatrans)

Lääketieteellinen tila ja patologia tutki ihon pigmentaatiota. Perustelut / perustelut tutkimukselle UV-säteily on sekä fysiologinen ärsyke ihon pigmentaatiolle että tärkein etiologinen tekijä melanoomassa. Viime aikoina on myös kuvattu näkyvän (sinisen) valon aiheuttavan ihon pigmentaatiota ilman ilmeistä karsinogeenista vaikutusta. On tehty tutkimuksia UV-säteilyn aiheuttamien geenien tunnistamiseksi melanosyyteissä ja valon aiheuttamasta ihon pigmentaatiosta vastaavien mekanismien ymmärtämiseksi. Näiden solujen harvinaisuus orvaskedessä (3 % soluista) on kuitenkin toistaiseksi ollut ylitsepääsemätön este tämän tavoitteen saavuttamiselle. Sama koskee näkyvää valoa, jonka tiedot ovat vielä hajanaisempia. Transkriptioanalyysitekniikoiden tulo yhden solun tai yhden ytimen tasolla antaa meille mahdollisuuden voittaa tämä este ja tunnistaa UV- ja sinisen valon transkriptiovaikutukset melanosyyteissä in situ sekä muissa ihosoluissa (keratinosyytit, fibroblastit). UV- ja sinisen valon säätelemien molekyylimekanismien ymmärtäminen melanosyyteissä ja muissa soluissa paljastaa uusia avainvaiheita ihon pigmentaatiossa. Tutkimuksemme tietoja käytetään uusien valolta suojaavien aineiden sekä pigmenttisairauksien hoitojen kehittämiseen. Ensisijainen tavoite Kuvaa auringon ultraviolettisäteilyn (UV) tai sinisen valon aiheuttamia geeniekspression vaihteluita ihmisen melanosyyteissä in vivo. Toissijaiset tavoitteet Kuvaa ultraviolettisäteilyn (UV) säteilyn tai sinisen valon aiheuttamia geeniekspression vaihteluita muissa ihosoluissa. Arviointikriteerit Yksisoluinen transkriptioanalyysi Immunomerkintä ihoosissa Populaatio ja inkluusioiden lukumäärä Terveet miespuoliset vapaaehtoiset, fototyyppi III Fitzpatrick-asteikolla, ikä 25 + 5 vuotta ja samanlainen runsaus (painoindeksi välillä 20-28). 2 inkluusiota Tutkimuksen kesto Tutkimuksen kokonaiskesto: 12 kuukautta Inkluusiovaiheen kesto: 1 kuukausi Potilaan osallistumisen kesto: 11 päivää Metodologia Kaksi tervettä vapaaehtoista altistetaan UV- tai näkyvälle valolle kyynärvarren alueella. Testialueille tehdään imurakkuloita ja ihobiopsiat, imukuplat transkriptiota varten, biopsiat immunohistokemiaa varten. Geenien ilmentymisen tutkimus eri solutyypeissä tehdään RNA-Seq:llä yksittäisissä soluissa käyttäen 10X genomiikan lähestymistapaa. Lopuksi tulosten validointi suoritetaan immunovärjäyksellä spesifisillä vasta-aineilla tai RNA-Scopella. Tutkimuksen kulku - Päivä 1: Tutkimus alkaa vähimmäiseryteemiannoksen (MED) määrittämisellä jokaiselle koehenkilölle kyynärvarsien alueella. Tämä määritys suoritetaan antamalla kuusi erilaista annosta kasvavissa vaiheissa 25 % UVB + UVA -säteistä (simuloitu auringon ultraviolettispektri) kuudelle valitulle testialueelle (kukin 1,3 cm²). Altistuneet alueet arvioidaan 24 + 2 tuntia altistuksen jälkeen päivänä 2, punoitus arvioidaan päivänä 2: DEM:n lukeminen ja säteilytykset kahdelle vyöhykkeelle kyynärvarsien alueella annoksella 2 DEM UV ja 48 J/ cm2 näkyvässä valossa. Kolmas säteilyttämätön alue toimii kontrollina. Päivä 3: Jokaiselle kolmelle testialueelle tehdään ihorakkula ja biopsia. Rakkulanesteeseen kerättyjä soluja käytetään transkriptomissa ja biopsioissa immunohistokemian validointia varten. Päivä 11: Koehenkilöt nähdään uudelleen kahdeksan päivää näytteenottopäivän jälkeen, eli 11. päivänä ompeleiden poistamista ja paranemisen seurantaa varten. Samana päivänä kunkin testialueen aiheuttaman UV-pigmentaation tason arviointi suoritetaan visuaalisesti ja kolorimetrialla.