高リスク腸上皮化生患者のリスク層別化のための分子検査の検証 (GCEP2 研究)

目的:

この研究の主な目的は、カスタマイズされた分子検査が、腸上皮化生 (IM) 患者の中で、異形成または胃癌 (GC) のリスクが非常に高い患者のサブグループを前向きに特定できるかどうかを判断することです。 この研究の第 2 の目的は、GC のリスクを予測するための血液マイクロ RNA バイオマーカーのパネルの予測値を検証し、次世代シーケンシングを使用してヘリコバクター ピロリ感染の検出精度を決定し、それを現在のものと比較することです。ゴールドスタンダード、尿素呼気試験。

研究デザイン:

GCのリスクが非常に高いIM患者のサブセットを特定するためにカスタマイズされた分子検査の臨床的有用性を評価する国際的な多施設コホート。 募集対象はOLGIM Stage 2～4のIMで500名。

更新されたシドニー生検プロトコルは臨床目的で定期的に実施されておらず、ほとんどの被験者はベースラインでの OLGIM 病期分類を確認する前に募集されるため、一部の被験者は、IM がないことが検出された場合、または IM であると評価された場合、研究から除外されます。 OLGIM ステージ 1、ベースライン OGD。

協力サイトは、関連する人口統計学的および臨床病理学的データを含む次の標本を提供するように要求されます (症例報告書に示されているように): DNA 抽出用の前庭部からのスナップ凍結組織および FFPE 組織、ピロリ菌抗体検査および miRNA プロファイリング用の血清、およびDNA抽出用のバフィーコート。

登録:

診療所で治験責任医師が診察した患者は、登録の対象となります。

ベースラインで少なくともステージ 2 ～ 4 の OLGIM を検出できなかったためにベースライン内視鏡検査後に中止される被​​験者の数を最小限に抑えるために、前庭部または身体のいずれかで中等度または重度の IM の病歴を持つ患者を優先して募集することができます。

ベースライン:

1. アンケート 被験者は、ベースラインアンケートに記入して、GCの人口統計、個人の病歴、ライフスタイル、および家族歴に関する情報を提供するよう求められます。 臨床データと識別子が記録されます。
2. 尿素呼気試験 被験者は、尿素呼気試験（UBT）を受ける前に、6時間または一晩絶食します。 13C尿素摂取前、摂取後10分、20分、30分に呼気採取を行う。
3. OGD と生検

被験者は、高精細白色光（1080p）の下でベースラインOGDを受け、生検でOLGIMステータスを確認します。 OGD のビデオ録画は、診断の検証手順中に実行されます。 胃粘膜生検は次のように行われます。

• 更新されたシドニーシステムに従って、AL、AG、IA、BL、BGからそれぞれ1つの生検が4％パラホルムアルデヒド（PFA）で固定され、組織学的検査に送られます
• AL での 2 つの隣接する生検、および BL での 2 つの隣接する生検は、液体窒素で急速冷凍されます。

場所は次のように定義されています。

• AL - 幽門から 2 ～ 3cm 以内の前庭部の曲率が小さい
• AG - 幽門から 2 ～ 3cm 以内の前庭部の曲率が大きい
• IA - incisura angularis
• BL - コーパスの小弯、角度から 4cm 近位
• BG - コーパスの大弯の中央部分、噴門から8cm

内視鏡医が前庭部および/またはコーパスに IM の疑いのある領域を観察した場合、これらの IM の疑いのある領域から、組織学的検査のための生検と隣接する 2 つの凍結生検を採取する必要があります。その代わり。

内視鏡医が前庭部および/またはコーパスに IM の疑いのある領域を観察した場合、これらの IM の疑いのある領域から 2 つの隣接する凍結生検を代わりに採取する必要があります。

OGD中に特定されたすべての粘膜病変は、通常の臨床診療の一環として個別に生検され、組織病理学的評価に送られます。

凍結生検サンプルは、高品質の組織バンクに保管されます。

調査官は、上記のプロトコルに従います。 ただし、患者の利益のために必要な場合は、プロトコルから逸脱することがあります。

採血、処理および分析:

各被験者から 20ml の血液が採取されます。 血清、血漿、バフィーコートが抽出されます。

組織学的評価:

すべての生検サンプルは、慢性胃炎、萎縮性胃炎、ピロリ菌の存在、IMおよび異形成の程度について評価されます。 これらは、更新されたシドニー システムを使用して採点されます。 IM の存在は、ヘマトキシリンおよびエオシン (H&E) 染色またはアルシアン ブルー (AB) 陽性発現に基づく球状細胞の存在によって示され、軽度、中等度、および高度に分類されます。 異形成は、改訂されたウィーン分類によって等級付けされ、癌腫の分類は、腫瘍の WHO 分類および AJCC 病期分類システムに従って行われます。 生検で IM の特徴を示す胃上皮粘膜の割合を評価して、OLGIM ステージを導出します。

分子テスト:

3 つの主なゲノム変化 - 突然変異頻度の増加、体細胞コピー数変化 (sCNA)、およびテロメア短縮 - は、IM から異形成または GC への疾患の進行、または IM の持続性との関連を示すために以前に確立されました。 IM サンプル中の sCNA のかなりの割合が、癌遺伝子 Myc が存在する染色体 8q に位置していることがわかりました。 カスタマイズされた分子検査は、主に反復変異遺伝子と IM 患者の染色体 8q 増幅を伴うゲノム領域を対象とするパネルに基づいて開発されます。 カスタマイズされたテストは、IM 患者をさらに層別化することを目的としています。 総ゲノム DNA は生検 (凍結組織および FFPE) および対応する血液サンプルから抽出されます。 対象となる遺伝子パネルが適用されるため、関心のある特定のゲノム領域が捕捉され、データ分析のコストと量が大幅に削減されます。 ライブラリの準備は、製造元の指示に従ってターゲット濃縮アッセイを使用して実行されます。 変異呼び出しと染色体 8q 増幅は、Genome Analysis Toolkit (GATK) ソフトウェアを使用して決定されます。 読み取りをサポートする少なくとも 10 のバリアントを持つ体細胞バリアント、またはコピー ニュートラル平均から少なくとも 2 標準偏差のセグメント化された平均カバレッジを持つコピー数バリアントが特定された場合、被験者はテスト陽性として分類されます。

miRNA プロファイリング: 血清からのトータル RNA が分離され、cDNA に変換され、定量化されます。 技術的変動と生物学的変動の両方を正規化した後のターゲット miRNA 発現レベルを分析して、健康状態と疾患状態の識別力が最も高い miRNA のパネルを特定します。 各被験者には、miRNA 発現プロファイルに基づいてスコアが割り当てられ、GC の可能性が示されます。 結果は、GC 診断のゴールド スタンダードである OGD および組織学と比較されます。

ファローアップ：

被験者は、1年目と3年目にステータスの更新のためにクリニックまたは電話でフォローアップされます。臨床データはアンケートを通じて収集されます。 アニバーサリー ベースライン OGD 日付の前後 6 か月のウィンドウ期間は許容されます。

被験者は、2年目と4年目にサーベイランスOGDを受け、被験者がエンドポイントに到達したかどうかを評価します。 生検は、記載されたプロトコルに従って行われます。 臨床データは質問票を通じて収集され、データベースが更新されます。 アニバーサリー ベースライン OGD 日付の前後 6 か月のウィンドウ期間は許容されます。

被験者は、5〜10年目の状態の更新のために、クリニックまたは電話で毎年フォローアップされます。 臨床データは、アンケートを通じて収集されます。 アニバーサリー ベースライン OGD 日付の前後 6 か月のウィンドウ期間は許容されます。 コホートにおける 4 年目以降の GC の発生率が、説明されている有意性と検出力のレベルで帰無仮説を棄却するのに十分である場合、5 ～ 10 年目の毎年のフォローアップを中止することができます。

サンプルサイズの計算:

前向きコホート研究の提案されたサンプルサイズは、進行時間の結果のログランク検定を使用して推定されました。 4 年間の進行の累積発生率が、テスト陽性グループで 10%、テスト陰性グループでそれぞれ 3% であると仮定すると (つまり、 ハザード比、HR = 3.5)、5% の有意水準と 85% の検出力に基づいて、480 のサンプル サイズが必要になります。 さらに 5% の減少を仮定すると、全体のサンプル サイズは 500 になります。

統計分析：

カテゴリ変数は、カイ 2 乗検定またはフィッシャーの正確確率検定を使用して分析されます。 連続変数は、スチューデントの t 検定またはマンホイットニーの U 検定を使用して分析されます。 単変量解析で P 値 <0.05 のパラメーターは、多変量解析に含まれます。 多変量解析は、Cox 回帰分析を使用して実行されます。 P <0.05 は、統計的に有意であると見なされます。