고위험 장상피화생 환자의 위험 계층화를 위한 분자 검사의 검증(GCEP2 연구)

목표:

이 연구의 주요 목적은 맞춤형 분자 검사가 장상피화생(IM) 환자 내에서 이형성증 또는 위암(GC)의 위험이 매우 높은 환자 하위 그룹을 전향적으로 식별할 수 있는지 여부를 결정하는 것입니다. 이 연구의 두 번째 목적은 GC의 위험을 예측하기 위한 혈액 microRNA 바이오마커 패널의 예측 값을 검증하고 차세대 시퀀싱을 사용하여 헬리코박터 파일로리 감염 검출의 정확도를 결정하고 현재와 비교하는 것입니다. 금본위제, 우레아 호흡 검사.

연구 설계:

GC 위험이 매우 높은 IM 환자의 하위 집합을 식별하기 위해 맞춤형 분자 테스트의 임상적 유용성을 평가하기 위한 국제 다중 센터 코호트. 모집대상은 OLGIM Stage 2~4의 IM으로 500명입니다.

업데이트된 시드니 생검 프로토콜은 임상 목적으로 일상적으로 수행되지 않고 대부분의 피험자가 기준선에서 OLGIM 병기를 확인하기 전에 모집되므로 일부 피험자는 IM이 없거나 IM이 없는 것으로 평가되는 경우 연구에서 제외됩니다. OLGIM 1기, 베이스라인 OGD.

협력 사이트는 관련 인구 통계학적 및 클리닉-병리학적 데이터와 함께 다음 표본을 제공하도록 요청됩니다(사례 보고서 양식에 표시된 대로): DNA 추출을 위한 전정부 부위의 스냅 동결 조직 및 FFPE 조직, H. pylori 항체 테스트 및 miRNA 프로파일링을 위한 혈청 , DNA 추출을 위한 버피 코트.

등록:

클리닉 동안 조사관이 본 환자는 등록을 위해 고려될 것입니다.

기준선에서 적어도 2-4단계 OLGIM을 감지하지 못하여 기준선 내시경 후 제외되는 피험자의 수를 최소화하기 위해 전정부 또는 신체 중 하나에서 중등도 또는 중증 IM 병력이 있는 환자를 우선 모집할 수 있습니다.

기준선:

1. 설문 피험자는 GC의 인구 통계, 개인 병력, 라이프스타일 및 가족력에 대한 정보를 제공하는 기준 설문지를 작성해야 합니다. 임상 데이터 및 식별자가 기록됩니다.
2. 요소 호흡 테스트 대상자는 요소 호흡 테스트(UBT)를 받기 전에 6시간 또는 하룻밤 동안 금식합니다. 호흡 채집은 13C 요소 섭취 전과 섭취 후 10분, 20분, 30분에 수행됩니다.
3. OGD 및 생검

피험자는 OLGIM 상태를 확인하기 위해 고화질 백색광(1080p) 및 생검 하에서 기본 OGD를 받게 됩니다. OGD의 비디오 녹화는 진단 확인 절차 중에 수행됩니다. 위 점막 생검은 다음과 같이 수행됩니다.

• 업데이트된 시드니 시스템에 따라 AL, AG, IA, BL, BG에서 각각 1개의 생검을 4% 파라포름알데히드(PFA)로 고정하고 조직 검사를 위해 보냅니다.
• AL에서 2개의 인접한 생검과 BL에서 2개의 인접한 생검이 액체 질소에서 급속 냉동됩니다.

위치는 다음과 같이 정의됩니다.

• AL - 유문의 2-3cm 이내의 전정부의 작은 곡률
• AG - 유문에서 2-3cm 이내의 전정부 만곡
• IA - 각막절치
• BL - 말뭉치의 더 작은 곡률, 각막에 근접한 4cm
• BG - 분문에서 8cm 떨어진 신체의 더 큰 곡률의 중간 부분

내시경의가 위에서 정의한 업데이트된 Sydney System 위치 내에 있는 전정부 및/또는 뇌체에서 IM이 의심되는 영역을 관찰하는 경우 조직학적 검사를 위한 생검과 2개의 인접한 동결 생검을 이러한 의심되는 IM 영역에서 채취해야 합니다. 대신에.

내시경의가 위에서 정의한 업데이트된 시드니 시스템 위치 외부에 있는 전정부 및/또는 뇌체에서 IM이 의심되는 영역을 관찰하는 경우, IM이 의심되는 영역에서 대신 인접한 2개의 동결 생검을 채취해야 합니다.

OGD 동안 확인된 모든 점막 병변은 정상적인 임상 실습의 일부로 별도로 생검되고 조직병리학적 평가를 위해 보내집니다.

냉동 생검 샘플은 고품질 조직 은행에 보관됩니다.

수사관은 위의 프로토콜을 따릅니다. 그러나 환자의 이익이 요구하는 경우 프로토콜에서 벗어날 수 있습니다.

혈액 수집, 처리 및 분석:

각 피험자로부터 20ml의 혈액을 채취합니다. 혈청, 혈장 및 연막이 추출됩니다.

조직학적 평가:

모든 생검 샘플은 만성 위염, 위축성 위염, H. pylori 유기체의 존재, IM 및 이형성증의 정도에 대해 평가됩니다. 이는 업데이트된 시드니 시스템을 사용하여 채점됩니다. IM의 존재는 헤마톡실린 및 에오신(H&E) 염색 또는 Alcian Blue(AB) 양성 발현에 기초한 글로브 세포의 존재에 의해 표시되며, 경도, 중등도 및 현저함으로 분류될 것이다. 이형성증은 개정된 비엔나 분류에 따라 등급이 매겨지며 암종의 분류는 WHO 종양 분류 및 AJCC 병기 체계에 따라 결정됩니다. 생검에서 IM의 특징을 보이는 위 상피 점막의 비율을 평가하여 OLGIM 단계를 도출합니다.

분자 테스트:

돌연변이 빈도 증가, sCNA(체세포 복제 수 변경) 및 텔로미어 단축의 세 가지 주요 게놈 변경은 이전에 IM에서 이형성증 또는 GC로의 질병 진행 또는 IM 지속과의 연관성을 보여주기 위해 확립되었습니다. IM 샘플에서 상당한 비율의 sCNA가 종양유전자 Myc가 상주하는 염색체 8q에 위치하는 것으로 밝혀졌습니다. IM 환자의 반복 변이 유전자 및 염색체 8q 증폭을 가진 게놈 영역을 주로 대상으로 하는 패널을 기반으로 맞춤형 분자 검사를 개발할 예정입니다. 맞춤형 테스트는 IM 환자를 더욱 계층화하는 것을 목표로 합니다. 전체 게놈 DNA는 생검(동결 조직 및 FFPE) 및 일치하는 혈액 샘플에서 추출됩니다. 표적 유전자 패널을 적용하여 관심 있는 특정 게놈 영역을 캡처하여 데이터 분석 비용과 양을 크게 줄입니다. 제조업체 지침에 따라 표적 농축 분석을 사용하여 라이브러리 준비를 수행합니다. 돌연변이 호출 및 염색체 8q 증폭은 Genome Analysis Toolkit(GATK) 소프트웨어를 사용하여 결정됩니다. 적어도 10개의 변이 지원 읽기가 있는 체세포 변이 또는 복사 중립 평균에서 적어도 2 표준 편차의 분절된 평균 적용 범위를 갖는 복사 수 변이가 식별되는 경우 피험자는 테스트 양성으로 분류됩니다.

miRNA 프로파일링: 혈청에서 총 RNA를 분리하고 cDNA로 변환한 다음 정량화합니다. 기술 및 생물학적 변이의 정규화 후 목표 miRNA 발현 수준을 분석하여 건강한 상태와 질병 상태 사이에서 가장 높은 차별력을 가진 miRNA 패널을 식별합니다. 각 피험자는 miRNA 발현 프로필을 기반으로 GC를 가질 가능성을 나타내는 점수가 할당됩니다. 그 결과는 GC의 진단을 위한 황금 표준인 OGD 및 조직학과 비교될 것입니다.

후속 조치:

피험자는 1년 및 3년차에 상태 업데이트를 위해 클리닉 또는 전화를 통해 후속 조치를 받게 됩니다. 임상 데이터는 설문지를 통해 수집됩니다. 기념일 기준 OGD 날짜 전후 6개월의 기간이 허용됩니다.

피험자는 피험자가 종점에 도달했는지 평가하기 위해 2년차와 4년차에 감시 OGD를 받게 됩니다. 생검은 설명된 프로토콜에 따라 수행됩니다. 설문지를 통해 임상 데이터를 수집하고 데이터베이스를 업데이트합니다. 기념일 기준 OGD 날짜 전후 6개월의 기간이 허용됩니다.

피험자는 5-10년 동안 상태 업데이트를 위해 클리닉 또는 전화를 통해 매년 후속 조치를 받게 됩니다. 임상 데이터는 설문지를 통해 수집됩니다. 기념일 기준 OGD 날짜 전후 6개월의 기간이 허용됩니다. 코호트 중 4년차 또는 그 이후에 GC 발생률이 설명된 유의 수준 및 검정력으로 귀무 가설을 기각하기에 충분할 경우, 5-10년차에 대한 연간 추적 조사가 중단될 수 있습니다.

샘플 크기 계산:

전향적 코호트 연구를 위해 제안된 샘플 크기는 진행 시간 결과에 대한 로그랭크 테스트를 사용하여 추정되었습니다. 4년 누적 진행 발생률을 테스트 양성 그룹에서 10%, 테스트 음성 그룹에서 각각 3%(즉, 위험비, HR = 3.5), 5%의 유의 수준과 85%의 검정력을 기준으로 480개의 샘플 크기가 필요합니다. 또한 감소를 5%로 가정하면 전체 샘플 크기는 500이 됩니다.

통계 분석:

범주형 변수는 카이제곱 검정 또는 피셔의 정확 검정을 사용하여 분석됩니다. 연속 변수는 스튜던트 t-테스트 또는 Mann-Whitney U 테스트를 사용하여 분석됩니다. 단변량 분석에서 P 값이 0.05 미만인 매개변수는 다변량 분석에 포함됩니다. 다변량 분석은 Cox 회귀 분석을 사용하여 수행됩니다. P <0.05는 통계적으로 유의한 것으로 간주됩니다.