CAR-T細胞注入を受けている患者における分子遺伝学的特徴付け (CAR_22)

近年、エクスビボ細胞培養および細胞工学のますます高度な方法の適用により、「CAR（キメラ抗原受容体）-T細胞療法」を含む新しい細胞治療プラットフォームの開発が可能になりました。 CAR-T 細胞療法は、特定の抗原に対するキメラ受容体を発現するように操作された T リンパ球を使用する療法であり、理論的にはすべての新生物の治療に適用できますが、現在は血液悪性腫瘍の治療により広く使用されています。 CAR-T 細胞療法で導入された最も革新的な側面の 1 つは、新生物に対する特異的免疫を構築する手段としてだけでなく、薬物としても機能する細胞です。

CAR-T 細胞療法プログラムは、次の 3 つの基本的なポイントに分けられます。

• エンジニアリングプロセス用の（アフェレーシスによる）リンパ球の収集。
• 収集されたリンパ球の形質導入と拡大を目的とした製造。
• リンパ球除去化学療法後の細胞産物の注入。

したがって、この療法の利点は、HLA を介した抗原認識の制限を受けないメカニズムで抗腫瘍活性を発現できるリンパ球で、腫瘍性疾患の制御が不十分な患者の免疫に燃料を補給できる可能性によって表されます。

現在、欧州連合とイタリアの販売承認 (MA) は、第 2 世代のキメラ構築物に基づく抗 CD19 CAR-T 細胞による治療の使用を規定しています。

• tisagenlecleucel (Kymriah): 難治性、移植後の再発、または 2 回目以降の再発の B 細胞性急性リンパ芽球性白血病 (ALL) に含まれる 25 歳までの小児患者および若年成人。びまん性リンパ腫の成人患者で、再発または難治性の大細胞型 B 細胞 (DLBCL) の全身療法を 2 回以上行った後全身療法を2回以上行った後に再発または難治性の濾胞性リンパ腫（LF）の成人患者。
• axicabtagene ciloleucel (Yescarta): びまん性大細胞型リンパ腫 B 細胞 (DLBCL) および縦隔の原発性リンパ腫、難治性または再発性大細胞型 B 細胞 (PMBCL) 細胞を有する成人患者で、2 回以上の全身療法を受けた患者。 3 ライン以上の全身療法を受けた後の難治性または再発性の濾胞性リンパ腫 (FL) の成人患者。
• brexucabtagene autoleucel (Tecartus): ブルトン型チロシンキナーゼ阻害剤を含む 2 つ以上の全身療法の後に再発または難治性の細胞リンパ腫マントル病 (MCL) の成人患者。 lisocabtagene maraleucel (Breyanzi) の販売承認は、びまん性大細胞型 B 細胞性リンパ腫 (DLBCL)、原発性縦隔大細胞型 B 細胞性リンパ腫 (PMBCL)、および濾胞性リンパ腫 (LF) グレード 3B、難治性または再発の治療薬としてまもなく取得される予定です。

ただし、CAR-T 療法の使用は、潜在的に深刻な、時には致命的な有害事象と無縁ではありません。毒性プロファイルでは、以下が特異なものとして認識されます。

• サイトカイン放出症候群 (CRS)
• B細胞形成不全（低ガンマグロブリン血症）
• 神経学的副作用
• 血液毒性
• 感染症。 したがって、一方では有害事象が無視できず、他方では 50% を超える患者のパーセンテージが得られた反応を失うことを考慮すると、CAR-T 細胞療法の有効性を高めて治療プロファイルを改善する必要があります。その毒性を減らします。 これらの戦略はどちらも、新生物細胞の耐性メカニズムの理解、CAR-T細胞の生物学、およびそれらが相互作用するすべての細胞（微小環境）および非細胞系の理解に関連しています。

この研究の重要性は、新生物細胞が CAR-T を介した細胞毒性のメカニズムを回避したり、抗原の構造を変更したりして、車;したがって、CAR-T細胞による治療に対する耐性のメカニズムを特定することが可能になります。 この研究のもう 1 つの強みは、臨床転帰 (毒性と治療への反応) に関連するリンパ系 (CAR+ および CAR-) および骨髄系細胞の亜集団を特定するための単一細胞配列決定によって表されます。

したがって、この研究の主な目的は次のとおりです。

• CAR-T 細胞療法を受けている血液悪性腫瘍の患者から採取した末梢血サンプルのゲノム研究。新生物細胞の特徴と治療への反応との相関関係を特定します (実験室および機器の基準に従って評価)。
• CAR+ および CAR- リンパ球集団と、末梢血サンプル中の単一細胞 RNA シーケンシング プラットフォームを使用した骨髄細胞集団の研究。治療への反応 (実験室および機器の基準に従って評価) および有害反応などの臨床転帰に関連する細胞動態を理解するためイベント (CRS、ICANS、sHLH、凝固障害、血球減少症、および自己免疫疾患)。

腫瘍プロファイリングは、さまざまな臨床転帰 (CAR-T 療法による治療に対する反応または不応性) を有する患者におけるバリアント特異的遺伝子 (VAF) (遊離 DNA 循環の NGS シーケンスによって特定される) の対立遺伝子頻度の速度論をもたらします。 単一細胞 RNA シーケンシング (scRNAseq) は、毒性の発生や細胞の喪失または維持など、患者の病歴に関連すると考えられる事象に付随して、遺伝子量の値と細胞クラスター (CAR+ および CAR- リンパ球細胞と骨髄細胞の亜集団) を出力します。可能性のある相関関係を確立するために、治療への反応。

この研究は、ボローニャの IRCCS AOU の高度細胞療法の部門プログラムで CAR-T 細胞注入を受けている 18 歳以上のすべての患者、合計 150 人の患者に対して年間約 50 人の患者に提案されます。

末梢血サンプルは、研究を実施するために使用され、次の時間に採取されます。

• アフェレーシスへ;
• 病棟に入るとき;
• 1 日あたり -1;
• 0日目（注入後2時間）。
• +1、+3、+5、+7、+9、+11、+13、+30、+90、+180、+365。

組織のサンプリングは、CAR-T 療法を受けている患者のルーチンの臨床診療における現在の標準を表すサンプリングと一致します。

サンプルは、定期的にスケジュールされている支援手順 (診断-治療) を無効にすることなく取得されます。