Molekylær-genetisk karakterisering hos patienter, der gennemgår CAR-T-celleinfusion (CAR_22)

I de senere år har anvendelsen af ​​stadig mere avancerede metoder til ex-vivo cellekultur og celleteknologi gjort det muligt at udvikle nye cellulære terapeutiske platforme, herunder "CAR (Kimærisk Antigen Receptor) - T-celleterapi". CAR-T-celleterapi er en terapi, der bruger T-lymfocytter, der er konstrueret til at udtrykke en kimærisk receptor rettet mod et specifikt antigen, teoretisk anvendelig til behandling af alle neoplasmer, men i øjeblikket mere udbredt i behandlingen af ​​hæmatologiske maligniteter. Et af de mest innovative aspekter, der introduceres med CAR-T-celleterapi, er det af levende lægemiddel, celler, der fungerer som et lægemiddel såvel som et middel til at opbygge specifik immunitet mod neoplasma.

CAR-T-celleterapiprogrammet er opdelt i tre grundlæggende punkter:

• indsamling af lymfocytter (ved aferese) bestemt til ingeniørprocessen;
• fremstillingen rettet mod at transducere og udvide de opsamlede lymfocytter;
• infusion af celleprodukt efter lymfodepletterende kemoterapi.

Fordelene ved denne terapi er derfor repræsenteret ved muligheden for at genopfylde patientens immunitet, der er mangelfuld i kontrollen af ​​den neoplastiske sygdom, med lymfocytter, der er i stand til at udtrykke en antineoplastisk aktivitet med mekanismer, der ikke er underlagt begrænsning af HLA-medieret antigengenkendelse.

I øjeblikket giver markedsføringstilladelsen (MA) i Den Europæiske Union og Italien mulighed for brug af terapier med anti-CD19 CAR-T-celler baseret på andengenerations kimæriske konstruktioner:

• tisagenlecleucel (Kymriah): pædiatriske patienter og unge voksne op til 25 år inkluderet med B-celle akut lymfatisk leukæmi (ALL), som er refraktær, recidiverende post-transplantation eller i anden eller yderligere recidiv; voksne patienter med diffust lymfom en recidiverende eller refraktær stor B-celle (DLBCL) efter to eller flere behandlingslinjer systemisk; voksne patienter med recidiverende eller refraktær follikulær lymfom (LF) efter to eller flere linjer med systemisk terapi.
• axicabtagene ciloleucel (Yescarta): voksne patienter med diffust stort lymfom B-celler (DLBCL) og primært lymfom i mediastinum, en refraktær eller recidiverende store B-celle (PMBCL) celler, efter to eller flere linier af systemisk terapi; voksne patienter med refraktær eller recidiverende follikulær lymfom (FL) efter tre eller flere linjer med systemisk terapi.
• brexucabtagene autoleucel (Tecartus): voksne patienter med celle lymfom kappesygdom (MCL) recidiverende eller refraktære efter to eller flere linjer med systemisk terapi inklusive en Brutons tyrosinkinasehæmmer. Markedsføringstilladelsen for lisocabtagene maraleucel (Breyanzi) forventes om kort tid til behandling af diffust storcellet B-celle lymfom (DLBCL), primært mediastinalt stort B-cellet lymfom (PMBCL) og follikulært lymfom (LF) grad 3B, refraktært eller recidiverende.

Imidlertid er brugen af ​​CAR-T-terapier ikke fri for potentielt alvorlige og nogle gange dødelige bivirkninger; I toksicitetsprofilen er følgende genkendelige som ejendommelige:

• cytokinfrigivelsessyndrom (CRS)
• B-celle aplasi (hypogammaglobulinæmi)
• neurologiske bivirkninger
• hæmatologisk toksicitet
• infektioner. I betragtning af at bivirkninger på den ene side ikke er ubetydelige, og på den anden side at en procentdel > 50 % af patienterne mister det opnåede respons, er det derfor nødvendigt at forbedre den terapeutiske profil af CAR-T-celleterapi ved at øge dens effektivitet og reducere dets toksicitet. Begge disse strategier er knyttet til forståelsen af ​​neoplastiske cellers resistensmekanismer, såvel som til CAR-T-cellernes biologi og alle de cellulære (mikromiljø) og ikke-cellulære systemer, som de interagerer med.

Betydningen af ​​undersøgelsen ligger i undersøgelserne, der har til formål at forstå de mulige strategier, der gør det muligt for den neoplastiske celle at unddrage sig mekanismerne bag CAR-T-medieret cytotoksicitet og/eller ændre strukturen af ​​antigenet, hvilket gør det funktionelt "usynligt" for interaktionen med bilen ; det vil således være muligt at identificere mekanismer for resistens over for behandling med CAR-T-celler. Et andet stærkt punkt i undersøgelsen er repræsenteret ved enkeltcelle-sekventering for at identificere subpopulationer af lymfoide (CAR+ og CAR-) og myeloidceller relateret til det kliniske resultat (toksicitet og respons på behandling).

Derfor er de primære mål med undersøgelsen:

• Genomiske undersøgelser i perifere blodprøver taget fra patienter ramt af hæmatologiske maligniteter, der gennemgår CAR-T-celleterapi, for at identificere sammenhænge mellem neoplastiske cellesignaturer og respons på terapi (evalueret i henhold til laboratorie- og instrumentelle standarder).
• Undersøgelse af CAR+ og CAR-lymfoide populationer og af myeloide populationer med enkeltcellede RNA-sekventeringsplatforme i perifere blodprøver for at forstå den cellulære dynamik relateret til kliniske resultater, såsom respons på terapi (evalueret i henhold til laboratorie- og instrumentelle standarder) og uønskede hændelser (CRS, ICANS, sHLH, koagulopati, cytopenier og autoimmune dyskrasier).

Tumorprofilering vil resultere i kinetikken af ​​allelfrekvensen af ​​variantspecifikke gener (VAF'er) (identificeret ved NGS-sekventering af frit DNA, der cirkulerer) hos patienter med forskelligt klinisk resultat (respons eller modstandsdygtighed over for behandling med CAR-T-terapi). Enkeltcellet RNA-sekventering (scRNAseq) vil udsende genoverflodsværdier og celleklynger (subpopulationer af CAR+ og CAR-lymfoide celler og myeloidceller) samtidig med hændelser, der anses for relevante i patientens kliniske historie, såsom forekomsten af ​​toksicitet og tab eller vedligeholdelse af respons på behandlingen for at fastslå de mulige sammenhænge.

Undersøgelsen vil blive foreslået til alle patienter i alderen ≥ 18 år, der gennemgår CAR-T-celleinfusion ved Departmental Program of Advanced Cellular Therapies af IRCCS AOU i Bologna, omkring 50 patienter om året for i alt 150 patienter.

Perifere blodprøver vil blive brugt til at udføre undersøgelsen, vil blive afhentet på følgende tidspunkter:

• til aferese;
• ved indtræden i afdelingen;
• pr. dag -1;
• på dag 0 (2 timer efter infusion);
• pr. dag +1, +3, +5, +7, +9, +11, +13, +30, +90, +180, +365;

Prøvetagningen af ​​væv falder sammen med prøveudtagningen, der repræsenterer den nuværende standard i rutinemæssig klinisk praksis hos patienten, der gennemgår CAR-T-terapi:

prøverne vil blive opnået uden at ugyldiggøre de regelmæssige planlagte assistanceprocedurer (diagnostisk-terapeutisk).