接受 CAR-T 细胞输注的患者的分子遗传学特征 (CAR_22)

近年来，越来越先进的离体细胞培养和细胞工程方法的应用使得开发包括“CAR（嵌合抗原受体）-T细胞疗法”在内的新型细胞治疗平台成为可能。 CAR-T细胞疗法是一种利用经过改造的T淋巴细胞表达针对特定抗原的嵌合受体的疗法，理论上适用于所有肿瘤的治疗，但目前更广泛用于血液系统恶性肿瘤的治疗。 CAR-T 细胞疗法引入的最具创新性的方面之一是活体药物，即充当药物的细胞以及建立针对肿瘤的特异性免疫力的手段。

CAR-T细胞治疗方案分为三个基本点：

• 收集用于工程过程的淋巴细胞（通过单采术）；
• 旨在转导和扩增收集的淋巴细胞的制造；
• 淋巴细胞清除化疗后输注细胞产物。

因此，这种疗法的优势体现在可以用淋巴细胞补充肿瘤疾病控制缺陷的患者的免疫力，该淋巴细胞能够以不受 HLA 介导的抗原识别限制的机制表达抗肿瘤活性。

目前，欧盟和意大利的上市许可 (MA) 规定使用基于第二代嵌合结构的抗 CD19 CAR-T 细胞疗法：

• tisagenlecleucel (Kymriah)：患有 B 细胞急性淋巴细胞白血病 (ALL) 的儿科患者和 25 岁以下的年轻人，这些患者在移植后难治性、复发性或第二次或进一步复发；患有弥漫性淋巴瘤的成年患者在接受两线或多线全身治疗后复发或难治性大 B 细胞 (DLBCL)；两线或多线全身治疗后复发或难治性滤泡性淋巴瘤 (LF) 的成年患者。
• axicabtagene ciloleucel (Yescarta)：患有弥漫性大 B 细胞淋巴瘤 (DLBCL) 和纵隔原发性淋巴瘤的成年患者，经过两线或更多线的全身治疗后，难治性或复发性大 B 细胞 (PMBCL) 细胞；三线或更多线全身治疗后患有难治性或复发性滤泡性淋巴瘤 (FL) 的成年患者。
• brexucabtagene autoleucel (Tecartus)：患有细胞淋巴瘤地幔病 (MCL) 的成年患者在接受包括布鲁顿氏酪氨酸激酶抑制剂在内的两线或多线全身治疗后复发或难治。 lisocabtagene maraleucel (Breyanzi) 有望很快获得上市许可，用于治疗弥漫性大 B 细胞淋巴瘤 (DLBCL)、原发性纵隔大 B 细胞淋巴瘤 (PMBCL) 和滤泡性淋巴瘤 (LF) 3B 级难治性或复发性淋巴瘤。

然而，使用 CAR-T 疗法并非没有潜在的严重甚至致命的不良事件；在毒性特征中，以下是可识别的特殊物质：

• 细胞因子释放综合征 (CRS)
• B 细胞发育不全（低丙种球蛋白血症）
• 神经系统不良反应
• 血液学毒性
• 感染。 因此，考虑到一方面不良事件不容忽视，另一方面超过 50% 的患者失去了获得的反应，有必要通过提高其疗效和改善 CAR-T 细胞疗法的治疗效果降低其毒性。 这两种策略都与了解肿瘤细胞的耐药机制以及 CAR-T 细胞及其相互作用的所有细胞（微环境）和非细胞系统的生物学有关。

该研究的重要性在于旨在了解允许肿瘤细胞逃避 CAR-T 介导的细胞毒性机制和/或改变抗原结构的可能策略的调查，使其在功能上“隐形”于与汽车；因此，将有可能确定对 CAR-T 细胞治疗产生耐药性的机制。 该研究的另一个亮点是单细胞测序，以确定与临床结果（毒性和治疗反应）相关的淋巴细胞（CAR+ 和 CAR-）和骨髓细胞亚群。

因此，研究的主要目标是：

• 对接受 CAR-T 细胞治疗的血液恶性肿瘤患者的外周血样本进行基因组研究，以确定肿瘤细胞特征与治疗反应之间的相关性（根据实验室和仪器标准进行评估）。
• 在外周血样本中使用单细胞 RNA 测序平台研究 CAR+ 和 CAR- 淋巴细胞群和骨髓细胞群，以了解与临床结果相关的细胞动力学，例如对治疗的反应（根据实验室和仪器标准评估）和不良反应事件（CRS、ICANS、sHLH、凝血病、血细胞减少和自身免疫性恶液质）。

肿瘤分析将导致具有不同临床结果（对 CAR-T 治疗的反应或难治性）的患者的变异特异性基因 (VAF) 等位基因频率的动力学（通过游离 DNA 循环的 NGS 测序鉴定）。 单细胞 RNA 测序 (scRNAseq) 将输出基因丰度值和细胞簇（CAR+ 和 CAR- 淋巴细胞和骨髓细胞的亚群），伴随患者临床病史中被认为相关的事件，例如毒性的发生和损失或维持对治疗的反应，以建立可能的相关性。

该研究将在博洛尼亚 IRCCS AOU 的高级细胞疗法部门计划中向所有年龄≥18 岁接受 CAR-T 细胞输注的患者提出，每年约 50 名患者，总共 150 名患者。

用于进行研究的外周血样本将在以下时间采集：

• 单采术；
• 进入病房时；
• 每天-1；
• 第 0 天（输注后 2 小时）；
• 每天 +1、+3、+5、+7、+9、+11、+13、+30、+90、+180、+365；

组织取样与代表接受 CAR-T 治疗的患者常规临床实践中当前标准的取样一致：

将在不使定期安排的辅助程序（诊断-治疗）失效的情况下获取样本。