CAR-T 세포 주입을 받는 환자의 분자유전학적 특성 규명 (CAR_22)

최근 몇 년 동안 점점 더 발전된 체외 세포 배양 및 세포 공학 방법의 적용으로 "CAR(Chimeric Antigen Receptor) - T 세포 요법"을 비롯한 새로운 세포 치료 플랫폼 개발이 가능해졌습니다. CAR-T 세포 치료제는 특정 항원에 대한 키메라 수용체를 발현하도록 조작된 T 림프구를 사용하는 치료제로, 이론적으로는 모든 신생물에 적용 가능하지만 현재는 혈액암 치료에 더 널리 사용되고 있다. CAR-T 세포 요법에 도입된 가장 혁신적인 측면 중 하나는 신생물에 대한 특정 면역을 구축하는 수단일 뿐만 아니라 약물 역할을 하는 세포인 살아있는 약물의 측면입니다.

CAR-T 세포 치료 프로그램은 세 가지 기본 사항으로 나뉩니다.

• 엔지니어링 프로세스를 위한 림프구 수집(성분채집술에 의한);
• 수집된 림프구의 형질도입 및 확장을 목적으로 하는 제조;
• 림프구 고갈 화학 요법 후 세포 제품의 주입.

따라서 이 치료법의 장점은 HLA 매개 항원 인식의 제한을 받지 않는 메커니즘으로 항종양 활성을 발현할 수 있는 림프구로 신생물성 질병의 조절이 부족한 환자의 면역을 재충전할 수 있는 가능성으로 나타납니다.

현재 유럽 연합과 이탈리아의 마케팅 승인(MA)은 2세대 키메라 구조를 기반으로 하는 항-CD19 CAR-T 세포를 사용한 치료법의 사용을 제공합니다.

• tisagenlecleucel(Kymriah): 불응성, 이식 후 재발성 또는 2차 또는 추가 재발인 B-세포 급성 림프구성 백혈병(ALL)을 포함하는 25세 이하의 소아 환자 및 청년; 미만성 림프종 성인 환자 2회 이상의 전신 치료 후 재발성 또는 불응성 거대 B 세포(DLBCL); 2회 이상의 전신 요법 후 재발성 또는 불응성 여포성 림프종(LF)이 있는 성인 환자.
• axicabtagene ciloleucel(Yescarta): 미만성 거대 림프종 B 세포(DLBCL) 및 종격동의 원발성 림프종 불응성 또는 재발성 거대 B 세포(PMBCL) 세포가 있는 성인 환자, 2회 이상의 전신 요법 후; 3회 이상의 전신 요법 후 불응성 또는 재발성 여포성 림프종(FL)이 있는 성인 환자.
• brexucabtagene autoleucel(Tecartus): Bruton's tyrosine kinase 억제제를 포함하여 2회 이상의 전신 요법 후 재발 또는 불응성인 세포 림프종 외투막 질환(MCL)이 있는 성인 환자. lisocabtagene maraleucel(Breyanzi)의 시판 승인은 미만성 거대 B세포 림프종(DLBCL), 원발성 종격동 거대 B세포 림프종(PMBCL) 및 여포성 림프종(LF) 등급 3B, 불응성 또는 재발성의 치료에 곧 출시될 것으로 예상됩니다.

그러나 CAR-T 요법의 사용은 잠재적으로 심각하고 때로는 치명적인 부작용으로부터 자유롭지 않습니다. 독성 프로필에서 다음은 특이한 것으로 인식할 수 있습니다.

• 사이토카인 방출 증후군(CRS)
• B 세포 무형성증(저감마글로불린혈증)
• 신경학적 부작용
• 혈액학적 독성
• 감염. 따라서 한편으로는 부작용이 무시할 수 없고 다른 한편으로는 환자의 퍼센트 > 50%가 얻은 반응을 상실한다는 점을 고려하여 CAR-T 세포 요법의 효능을 증가시켜 치료 프로필을 개선하고 독성 감소 . 이 두 가지 전략은 종양 세포의 저항 메커니즘에 대한 이해뿐만 아니라 CAR-T 세포의 생물학과 이들이 상호 작용하는 모든 세포(미세 환경) 및 비세포 시스템에 대한 이해와 연결되어 있습니다.

이 연구의 중요성은 종양 세포가 CAR-T 매개 세포 독성의 메커니즘을 회피하고/하거나 항원의 구조를 변경하여 기능적으로 상호 작용에 대해 "보이지 않게" 만드는 가능한 전략을 이해하는 것을 목표로 하는 조사에 있습니다. 자동차 ; 따라서 CAR-T 세포 치료에 대한 저항성 메커니즘을 식별하는 것이 가능할 것입니다. 이 연구의 또 다른 장점은 임상 결과(독성 및 치료에 대한 반응)와 관련된 림프구(CAR+ 및 CAR-) 및 골수 세포의 하위 집단을 식별하기 위한 단일 세포 시퀀싱으로 나타납니다.

따라서 연구의 주요 목적은 다음과 같습니다.

• 신생물 세포 시그니처와 치료에 대한 반응 사이의 상관관계를 확인하기 위해 CAR-T 세포 치료를 받는 혈액 악성 종양의 영향을 받는 환자로부터 채취한 말초 혈액 샘플의 게놈 연구(실험실 및 기기 표준에 따라 평가).
• 치료에 대한 반응(실험실 및 기기 표준에 따라 평가) 및 부작용과 같은 임상 결과와 관련된 세포 역학을 이해하기 위해 말초 혈액 샘플에서 단일 세포 RNA 시퀀싱 플랫폼을 사용한 CAR+ 및 CAR- 림프구 집단 및 골수 집단 연구 사건(CRS, ICANS, sHLH, 응고병증, 혈구감소증 및 자가면역 질환).

종양 프로파일링은 다른 임상 결과(CAR-T 치료에 대한 반응 또는 불응성)를 가진 환자에서 변이체 특이적 유전자(VAF)(자유 DNA 순환의 NGS 시퀀싱에 의해 식별됨)의 대립 유전자 빈도의 동역학을 초래할 것입니다. 단일 세포 RNA 염기서열 분석(scRNAseq)은 독성 발생 및 손실 또는 유지와 같이 환자의 임상 병력과 관련이 있는 것으로 간주되는 사건과 동시에 유전자 존재비 값 및 세포 클러스터(CAR+ 및 CAR- 림프구 세포 및 골수 세포의 하위 집단)를 출력합니다. 가능한 상관 관계를 확립하기 위해 치료에 대한 반응.

이 연구는 볼로냐의 IRCCS AOU의 고급 세포 치료 부서 프로그램에서 CAR-T 세포 주입을 받는 18세 이상의 모든 환자, 총 150명의 환자에 대해 연간 약 50명의 환자에게 제안될 것입니다.

연구를 수행하는 데 사용될 말초 혈액 샘플은 다음 시간에 수집됩니다.

• 성분 채집;
• 와드에 들어갈 때;
• 하루 -1;
• 0일(주입 후 2시간);
• 하루 +1, +3, +5, +7, +9, +11, +13, +30, +90, +180, +365;

조직 샘플링은 CAR-T 요법을 받는 환자의 일상적인 임상 실습에서 현재 표준을 나타내는 샘플링과 일치합니다.

정기적으로 예정된 지원 절차(진단-치료)를 무효화하지 않고 샘플을 채취합니다.