Molekylær-genetisk karakterisering hos pasienter som gjennomgår CAR-T-celleinfusjon (CAR_22)

De siste årene har anvendelsen av stadig mer avanserte metoder for ex-vivo cellekultur og celleteknikk gjort det mulig å utvikle nye cellulære terapeutiske plattformer inkludert "CAR (Khimerisk antigenreseptor) - T-celleterapi". CAR-T-celleterapi er en terapi som bruker T-lymfocytter konstruert for å uttrykke en kimær reseptor rettet mot et spesifikt antigen, teoretisk anvendelig for behandling av alle neoplasmer, men for tiden mer utbredt i behandlingen av hematologiske maligniteter. Et av de mest innovative aspektene som introduseres med CAR-T-celleterapi er det av levende stoff, celler som fungerer som et medikament så vel som et middel for å bygge spesifikk immunitet mot neoplasma.

CAR-T-celleterapiprogrammet er delt inn i tre grunnleggende punkter:

• samling av lymfocytter (ved aferese) bestemt for ingeniørprosessen;
• produksjonen tar sikte på å transdusere og utvide de innsamlede lymfocyttene;
• infusjon av celleprodukt etter lymfodepletterende kjemoterapi.

Fordelene ved denne terapien er derfor representert ved muligheten for å fylle på pasientens immunitet, mangelfull i kontroll av den neoplastiske sykdommen, med lymfocytter som er i stand til å uttrykke en antineoplastisk aktivitet med mekanismer som ikke er underlagt begrensning av HLA-mediert antigengjenkjenning.

For tiden gir markedsføringstillatelsen (MA) i EU og Italia bruk av terapier med anti-CD19 CAR-T-celler basert på andre generasjons kimære konstruksjoner:

• tisagenlecleucel (Kymriah): pediatriske pasienter og unge voksne opp til 25 år inkludert med B-celle akutt lymfoblastisk leukemi (ALL) som er refraktær, residiverende etter transplantasjon eller i andre eller ytterligere tilbakefall; voksne pasienter med diffust lymfom en residiverende eller refraktær stor B-celle (DLBCL) etter to eller flere behandlingslinjer systemisk; voksne pasienter med residiverende eller refraktær follikulær lymfom (LF) etter to eller flere linjer med systemisk terapi.
• axicabtagene ciloleucel (Yescarta): voksne pasienter med diffust stort lymfom B-celler (DLBCL) og primært lymfom i mediastinum en refraktær eller residiverende store B-celle (PMBCL) celler, etter to eller flere linjer med systemisk terapi; voksne pasienter med refraktær eller residiverende follikulær lymfom (FL) etter tre eller flere linjer med systemisk terapi.
• brexucabtagene autoleucel (Tecartus): voksne pasienter med celle lymfom mantelsykdom (MCL) residiverende eller refraktær etter to eller flere linjer med systemisk terapi inkludert en Brutons tyrosinkinasehemmer. Markedsføringstillatelsen for lisocabtagene maraleucel (Breyanzi) forventes om kort tid for behandling av diffust storcellet B-celle lymfom (DLBCL), primært mediastinalt stort B-celle lymfom (PMBCL) og follikulært lymfom (LF) grad 3B, refraktært eller residiverende.

Imidlertid er bruken av CAR-T-terapier ikke fri for potensielt alvorlige og noen ganger dødelige bivirkninger; i toksisitetsprofilen er følgende gjenkjennelige som særegne:

• cytokinfrigjøringssyndrom (CRS)
• B-celleaplasi (hypogammaglobulinemi)
• nevrologiske bivirkninger
• hematologisk toksisitet
• infeksjoner. Tatt i betraktning at på den ene siden uønskede hendelser ikke er ubetydelige og på den andre siden at en prosentandel > 50 % av pasientene mister den oppnådde responsen, er det nødvendig å forbedre den terapeutiske profilen til CAR-T-celleterapi ved å øke dens effektivitet og redusere dens toksisitet. Begge disse strategiene er knyttet til forståelsen av resistensmekanismene til neoplastiske celler, så vel som til biologien til CAR-T-celler og til alle cellulære (mikromiljø) og ikke-cellulære systemer som de samhandler med.

Betydningen av studien ligger i undersøkelsene som tar sikte på å forstå de mulige strategiene som lar den neoplastiske cellen unngå mekanismene for CAR-T-mediert cytotoksisitet og/eller endre strukturen til antigenet, noe som gjør det funksjonelt "usynlig" for interaksjon med bilen ; det vil dermed være mulig å identifisere mekanismer for resistens mot behandling med CAR-T-celler. Et annet sterkt punkt i studien er representert ved enkeltcellesekvensering for å identifisere subpopulasjoner av lymfoide (CAR+ og CAR-) og myeloidceller relatert til det kliniske resultatet (toksisitet og respons på behandling).

Derfor er hovedmålene med studien:

• Genomiske studier i perifere blodprøver tatt fra pasienter rammet av hematologiske maligniteter som gjennomgår CAR-T-celleterapi, for å identifisere korrelasjoner mellom neoplastiske cellesignaturer og respons på terapi (evaluert i henhold til laboratorie- og instrumentelle standarder).
• Studie av CAR+ og CAR-lymfoide populasjoner og av myeloide populasjoner med enkeltcellede RNA-sekvenseringsplattformer i perifere blodprøver for å forstå cellulære dynamikk relatert til kliniske utfall som respons på terapi (evaluert i henhold til laboratorie- og instrumentelle standarder) og uønskede hendelser (CRS, ICANS, sHLH, koagulopati, cytopenier og autoimmune dyskrasier).

Tumorprofilering vil resultere i kinetikken til allelfrekvensen til variantspesifikke gener (VAF) (identifisert ved NGS-sekvensering av fritt DNA som sirkulerer) hos pasienter med ulikt klinisk utfall (respons eller refraktæritet til behandling med CAR-T-terapi). Enkeltcelle-RNA-sekvensering (scRNAseq) vil produsere genoverflodsverdier og celleklynger (subpopulasjoner av CAR+ og CAR-lymfoide celler og myeloidceller) samtidig med hendelser som anses som relevante i pasientens kliniske historie, som forekomst av toksisitet og tap eller vedlikehold av respons på behandling, for å etablere mulige sammenhenger.

Studien vil bli foreslått for alle pasienter i alderen ≥ 18 år som gjennomgår CAR-T-celleinfusjon ved Departmental Program of Advanced Cellular Therapies ved IRCCS AOU i Bologna, ca. 50 pasienter i året for totalt 150 pasienter.

Perifere blodprøver vil bli brukt til å utføre studien vil bli hentet på følgende tidspunkter:

• til aferese;
• ved innreise på avdelingen;
• per dag -1;
• på dag 0 (2 timer etter infusjon);
• per dag +1, +3, +5, +7, +9, +11, +13, +30, +90, +180, +365;

Prøvetakingen av vev faller sammen med prøvetakingen som representerer gjeldende standard i rutinemessig klinisk praksis hos pasienten som gjennomgår CAR-T-behandling:

prøvene vil bli innhentet uten å ugyldiggjøre assistanseprosedyrene (diagnostisk-terapeutisk) regelmessig planlagt.