Molekuláris-genetikai jellemzés CAR-T sejtinfúzión átesett betegeknél (CAR_22)

Az elmúlt években az ex vivo sejtkultúra és sejtsejtfejlesztés egyre fejlettebb módszereinek alkalmazása lehetővé tette új celluláris terápiás platformok kifejlesztését, beleértve a "CAR (Chimeric Antigen Receptor) – T-sejt terápiát". A CAR-T sejtterápia egy olyan terápia, amely egy specifikus antigén elleni kiméra receptor expresszálására tervezett T-limfocitákat alkalmaz, elméletileg minden daganat kezelésére alkalmazható, de jelenleg szélesebb körben alkalmazzák a hematológiai rosszindulatú daganatok kezelésében. A CAR-T sejtterápia során bevezetett egyik leginnovatívabb szempont az élő gyógyszer, a sejtek, amelyek gyógyszerként, valamint a daganatok elleni specifikus immunitás kiépítésére szolgálnak.

A CAR-T sejtterápiás program három alapvető pontra oszlik:

• a limfociták összegyűjtése (aferézissel) a mérnöki folyamathoz;
• az összegyűjtött limfociták transzdukálására és kiterjesztésére irányuló gyártás;
• sejttermék infúziója limfodepletáló kemoterápia után.

Ennek a terápiának az előnyei tehát abban rejlenek, hogy a neoplasztikus betegség leküzdésében hiányos páciens immunitását olyan limfociták töltik fel, amelyek képesek daganatellenes aktivitást kifejezni olyan mechanizmusokkal, amelyek nem vonatkoznak a HLA által közvetített antigénfelismerés korlátozására.

Jelenleg az Európai Unióban és Olaszországban a forgalomba hozatali engedély (MA) rendelkezik a második generációs kiméra konstrukciókon alapuló anti-CD19 CAR-T sejtekkel történő terápiák alkalmazásáról:

• tisagenlecleucel (Kymriah): gyermekgyógyászati ​​betegek és 25 év alatti fiatal felnőttek, akik B-sejtes akut limfoblasztos leukémiában (ALL) szenvednek, amely refrakter, átültetés után kiújul, vagy második vagy további kiújulásban van; diffúz limfómában szenvedő, kiújult vagy refrakter nagy B-sejtes (DLBCL) felnőtt betegek két vagy több sorozatos szisztémás terápia után; Relapszusban vagy refrakter follikuláris limfómában (LF) szenvedő felnőtt betegek két vagy több sorozatos szisztémás terápia után.
• axicabtagene ciloleucel (Yescarta): felnőtt betegek diffúz nagy limfóma B-sejtes (DLBCL) és primer limfómában a mediastinum refrakter vagy relapszáló nagy B-sejtes (PMBCL) sejtekben, két vagy több sor szisztémás terápia után; refrakter vagy kiújult follikuláris limfómában (FL) szenvedő felnőtt betegek három vagy több sor szisztémás terápia után.
• brexucabtagene autoleucel (Tecartus): sejt limfóma köpenybetegségben (MCL) szenvedő felnőtt betegek, akik két vagy több sorozatos szisztémás terápia után kiújultak vagy refrakterek, beleértve a Bruton-féle tirozin-kináz inhibitort. A lisocabtagene maraleucel (Breyanzi) forgalomba hozatali engedélye hamarosan várható a diffúz nagy B-sejtes limfóma (DLBCL), a primer mediastinalis nagy B-sejtes limfóma (PMBCL) és a 3B fokozatú follikuláris limfóma (LF), refrakter vagy visszaeső kezelésére.

A CAR-T terápiák alkalmazása azonban nem mentes a potenciálisan súlyos és néha halálos nemkívánatos eseményektől; a toxicitási profilban a következők sajátosként ismerhetők fel:

• citokin felszabadulási szindróma (CRS)
• B-sejtes aplasia (hipogammaglobulinémia)
• neurológiai mellékhatások
• hematológiai toxicitás
• fertőzések. Ezért tekintettel arra, hogy egyrészt a nemkívánatos események nem elhanyagolhatók, másrészt a betegek több mint 50%-a elveszíti a kapott választ, szükséges a CAR-T sejtterápia terápiás profiljának javítása annak hatékonyságának növelésével, mérgező hatásának csökkentése. Mindkét stratégia a neoplasztikus sejtek rezisztencia-mechanizmusainak megértéséhez, valamint a CAR-T sejtek biológiájához, valamint az összes sejtes (mikrokörnyezet) és nem sejtrendszerhez kapcsolódik, amellyel kölcsönhatásba lépnek.

A tanulmány jelentősége azokban a vizsgálatokban rejlik, amelyek célja azoknak a lehetséges stratégiáknak a megértése, amelyek lehetővé teszik a daganatos sejt számára, hogy kikerülje a CAR-T által közvetített citotoxicitás mechanizmusait és/vagy megváltoztassa az antigén szerkezetét, ezáltal funkcionálisan "láthatatlan" a kölcsönhatás számára. az autó ; így lehetővé válik a CAR-T sejtekkel szembeni kezeléssel szembeni rezisztencia mechanizmusainak azonosítása. A vizsgálat másik erős pontja az egysejtű szekvenálás, amely a limfoid (CAR+ és CAR-) és mieloid sejtek alpopulációit azonosítja a klinikai kimenetelhez (toxicitás és kezelésre adott válasz) kapcsolatban.

Ezért a tanulmány elsődleges céljai a következők:

• A CAR-T sejtterápián átesett hematológiai rosszindulatú betegektől vett perifériás vérminták genomikai vizsgálata a daganatos sejtjelek és a terápiára adott válasz közötti összefüggések azonosítása céljából (laboratóriumi és műszeres standardok szerint értékelve).
• CAR+ és CAR- limfoid populációk és mieloid populációk tanulmányozása perifériás vérmintákban egysejtes RNS szekvenáló platformokkal, hogy megértsük a klinikai kimenetelekkel kapcsolatos sejtdinamikát, mint például a terápiára adott válasz (laboratóriumi és műszeres standardok szerint értékelve) és a káros hatásokat. események (CRS, ICANS, sHLH, coagulopathia, cytopeniák és autoimmun diszkraziák).

A tumorprofilozás a variánsspecifikus gének (VAF-ok) allélgyakoriságának kinetikáját eredményezi (amelyet a keringő szabad DNS NGS-szekvenálásával azonosítanak) különböző klinikai kimenetelű betegeknél (a CAR-T terápiával végzett kezelésre adott válasz vagy refrakter). Az egysejtes RNS szekvenálás (scRNAseq) génbőségi értékeket és sejtklasztereket (CAR+ és CAR- limfoid sejtek és mieloid sejtek alpopulációit) ad ki a páciens klinikai anamnézisében relevánsnak ítélt eseményekkel, mint például a toxicitás előfordulása és a a kezelésre adott választ, a lehetséges összefüggések megállapítása érdekében.

A vizsgálatot minden 18 év feletti, CAR-T-sejt-infúzión áteső beteg számára javasolják a bolognai IRCCS AOU fejlett sejtterápiás osztályának programjában, évente körülbelül 50 betegnek, összesen 150 betegnek.

A vizsgálat elvégzéséhez perifériás vérmintákat vesznek fel a következő időpontokban:

• aferézishez;
• a kórterembe való belépéskor;
• naponta -1;
• a 0. napon (2 órával az infúzió után);
• naponta +1, +3, +5, +7, +9, +11, +13, +30, +90, +180, +365;

A szövetmintavétel egybeesik azzal a mintavétellel, amely a rutin klinikai gyakorlatban a jelenlegi standardot képviseli a CAR-T terápiában részesülő betegeknél:

a mintákat a rendszeresen ütemezett segítségnyújtási eljárások (diagnosztikai-terápiás) érvénytelenítése nélkül veszik.