Молекулярно-генетическая характеристика пациентов, перенесших инфузию CAR-T-клеток (CAR_22)

В последние годы применение все более передовых методов культивирования клеток ex-vivo и клеточной инженерии позволило разработать новые клеточные терапевтические платформы, включая «CAR (химерный антигенный рецептор) - Т-клеточная терапия». CAR-T-клеточная терапия представляет собой терапию, в которой используются Т-лимфоциты, сконструированные для экспрессии химерного рецептора, направленного против специфического антигена, теоретически применимого для лечения всех новообразований, но в настоящее время более широко используемого при лечении гематологических злокачественных новообразований. Одним из самых инновационных аспектов, представленных в терапии CAR-T-клетками, является использование живых лекарств, клеток, которые действуют как лекарство, а также как средство для создания специфического иммунитета против новообразования.

Программа терапии CAR-T-клетками делится на три основных пункта:

• сбор лимфоцитов (методом афереза), предназначенных для инженерного процесса;
• производство, направленное на трансдукцию и размножение собранных лимфоцитов;
• введение клеточного продукта после лимфодеплетирующей химиотерапии.

Таким образом, преимущества этой терапии представлены возможностью дозаправки иммунитета пациента, недостаточного в контроле неопластического заболевания, лимфоцитами, способными проявлять противоопухолевую активность с механизмами, не подверженными ограничению HLA-опосредованного распознавания антигена.

В настоящее время регистрационное удостоверение (MA) в Европейском союзе и Италии предусматривает использование терапии анти-CD19 CAR-T-клетками на основе химерных конструкций второго поколения:

• tisagenlecleucel (Kymriah): педиатрические пациенты и молодые люди в возрасте до 25 лет с В-клеточным острым лимфобластным лейкозом (ALL), который является рефрактерным, рецидивирующим после трансплантации или вторым или последующим рецидивом; взрослые пациенты с диффузной лимфомой с рецидивом или рефрактерной крупноклеточной В-клеткой (DLBCL) после двух или более линий системной терапии; взрослые пациенты с рецидивирующей или рефрактерной фолликулярной лимфомой (ЛФ) после двух и более линий системной терапии.
• axicabtagene ciloleucel (Yescarta): взрослые пациенты с диффузной В-крупноклеточной лимфомой (DLBCL) и первичной лимфомой средостения с рефрактерными или рецидивирующими крупноклеточными B-клетками (PMBCL) после двух или более линий системной терапии; взрослые пациенты с рефрактерной или рецидивирующей фолликулярной лимфомой (ФЛ) после трех и более линий системной терапии.
• brexucabtagene autoleucel (Tecartus): взрослые пациенты с клеточной лимфомой мантийной болезни (MCL), рецидивирующей или рефрактерной после двух или более линий системной терапии, включая ингибитор тирозинкиназы Брутона. В ближайшее время ожидается получение регистрационного удостоверения на лизокабтаген маралеуцел (Breyanzi) для лечения диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы (DLBCL), первичной медиастинальной крупноклеточной B-клеточной лимфомы (PMBCL) и фолликулярной лимфомы (LF) степени 3B, рефрактерной или рецидивирующей.

Однако использование терапии CAR-T не лишено потенциально серьезных, а иногда и летальных побочных эффектов; в профиле токсичности распознаются следующие особенности:

• синдром выброса цитокинов (СВЦ)
• В-клеточная аплазия (гипогаммаглобулинемия)
• неврологические побочные реакции
• гематологическая токсичность
• инфекции. Поэтому, учитывая, что, с одной стороны, нежелательные явления не являются незначительными, а с другой стороны, процент > 50% пациентов теряет полученный ответ, необходимо улучшить терапевтический профиль CAR-T-клеточной терапии за счет повышения ее эффективности и снижение его токсичности. Обе эти стратегии связаны с пониманием механизмов резистентности опухолевых клеток, а также с биологией CAR-T-клеток и всех клеточных (микроокружения) и неклеточных систем, с которыми они взаимодействуют.

Важность исследования заключается в исследованиях, направленных на понимание возможных стратегий, позволяющих опухолевой клетке уклоняться от механизмов CAR-T-опосредованной цитотоксичности и/или изменять структуру антигена, делая его функционально «невидимым» для взаимодействия с машина ; таким образом станет возможным идентифицировать механизмы устойчивости к лечению CAR-T-клетками. Другой сильной стороной исследования является секвенирование отдельных клеток для выявления субпопуляций лимфоидных (CAR+ и CAR-) и миелоидных клеток, связанных с клиническим исходом (токсичностью и реакцией на лечение).

Поэтому основными задачами исследования являются:

• Геномные исследования в образцах периферической крови, взятых у пациентов с онкогематологическими заболеваниями, получающих терапию CAR-T-клетками, с целью выявления корреляций между сигнатурами опухолевых клеток и реакцией на терапию (оценивается в соответствии с лабораторными и инструментальными стандартами).
• Изучение популяций CAR+ и CAR-лимфоидных популяций и миелоидных популяций с помощью платформ для секвенирования одноклеточной РНК в образцах периферической крови с целью понимания клеточной динамики, связанной с клиническими исходами, такими как ответ на терапию (оценивается в соответствии с лабораторными и инструментальными стандартами) и нежелательные явления. события (CRS, ICANS, sHLH, коагулопатия, цитопения и аутоиммунная дискразия).

Профилирование опухоли приведет к кинетике частоты аллелей вариантов специфических генов (VAF) (выявленных с помощью NGS-секвенирования циркулирующей свободной ДНК) у пациентов с различным клиническим исходом (ответ или рефрактерность к лечению CAR-T-терапией). Секвенирование одиночной клеточной РНК (scRNAseq) выводит значения распространенности генов и клеточные кластеры (субпопуляции CAR+ и CAR- лимфоидных клеток и миелоидных клеток) одновременно с событиями, считающимися значимыми в истории болезни пациента, такими как возникновение токсичности и потеря или сохранение ответ на лечение, чтобы установить возможные корреляции.

Исследование будет предложено всем пациентам в возрасте ≥ 18 лет, которым проводится инфузия CAR-T-клеток в рамках Ведомственной программы передовой клеточной терапии IRCCS AOU в Болонье, около 50 пациентов в год, всего 150 пациентов.

Образцы периферической крови, которые будут использоваться для проведения исследования, будут взяты в следующее время:

• к аферезу;
• при входе в палату;
• в сутки -1;
• в день 0 (через 2 ч после инфузии);
• в сутки +1, +3, +5, +7, +9, +11, +13, +30, +90, +180, +365;

Забор тканей совпадает с забором образцов, который представляет собой текущий стандарт в рутинной клинической практике у пациента, проходящего CAR-T-терапию:

образцы будут получены без аннулирования регулярно запланированных вспомогательных процедур (диагностических и терапевтических).