Molekylär-genetisk karakterisering hos patienter som genomgår CAR-T-cellinfusion (CAR_22)

Under de senaste åren har tillämpningen av allt mer avancerade metoder för ex-vivo cellodling och cellteknik gjort det möjligt att utveckla nya cellulära terapeutiska plattformar inklusive "CAR (Chimeric Antigen Receptor) - T-cellsterapi". CAR-T-cellterapi är en terapi som använder T-lymfocyter konstruerade för att uttrycka en chimär receptor riktad mot ett specifikt antigen, teoretiskt tillämpbar för behandling av alla neoplasmer men för närvarande mer allmänt använd vid behandling av hematologiska maligniteter. En av de mest innovativa aspekterna som introduceras med CAR-T-cellterapi är den av levande läkemedel, celler som fungerar som ett läkemedel såväl som ett sätt att bygga specifik immunitet mot neoplasman.

CAR-T-cellterapiprogrammet är uppdelat i tre grundläggande punkter:

• insamling av lymfocyter (genom aferes) avsedda för ingenjörsprocessen;
• tillverkningen syftar till att omvandla och expandera de uppsamlade lymfocyterna;
• infusion av cellprodukt efter lymfodpletterande kemoterapi.

Fördelarna med denna terapi representeras därför av möjligheten att fylla på patientens immunitet, som saknar kontroll av den neoplastiska sjukdomen, med lymfocyter som kan uttrycka en antineoplastisk aktivitet med mekanismer som inte är föremål för begränsning av HLA-medierad antigenigenkänning.

För närvarande föreskriver marknadsföringstillståndet (MA) i Europeiska unionen och Italien användning av terapier med anti-CD19 CAR-T-celler baserade på andra generationens chimära konstruktioner:

• tisagenlecleucel (Kymriah): pediatriska patienter och unga vuxna upp till 25 år inkluderade med B-cells akut lymfoblastisk leukemi (ALL) som är refraktär, återfallande efter transplantation eller i andra eller ytterligare recidiv; vuxna patienter med diffust lymfom en recidiverande eller refraktär stor B-cell (DLBCL) efter två eller flera behandlingslinjer systemisk; vuxna patienter med återfall eller refraktärt follikulärt lymfom (LF) efter två eller flera rader av systemisk terapi.
• axicabtagene ciloleucel (Yescarta): vuxna patienter med diffusa stora lymfom B-celler (DLBCL) och primära lymfom i mediastinum, en refraktär eller återfallande stora B-cell (PMBCL) celler, efter två eller flera rader av systemisk terapi; vuxna patienter med refraktärt eller återfallande follikulärt lymfom (FL) efter tre eller flera rader av systemisk terapi.
• brexucabtagene autoleucel (Tecartus): vuxna patienter med celllymfommantelsjukdom (MCL) återfall eller refraktär efter två eller flera rader av systemisk terapi inklusive en Brutons tyrosinkinashämmare. Marknadsföringstillståndet för lisocabtagene maraleucel (Breyanzi) väntas inom kort för behandling av diffust storcelligt B-cellslymfom (DLBCL), primärt mediastinalt storcelligt B-cellslymfom (PMBCL) och follikulärt lymfom (LF) grad 3B, refraktär eller skov.

Användningen av CAR-T-terapier är dock inte fri från potentiellt allvarliga och ibland dödliga biverkningar; i toxicitetsprofilen är följande igenkännbara som märkliga:

• cytokinfrisättningssyndrom (CRS)
• B-cellsaplasi (hypogammaglobulinemi)
• neurologiska biverkningar
• hematologisk toxicitet
• infektioner. Med tanke på att å ena sidan biverkningar inte är försumbara och å andra sidan att en procentandel > 50 % av patienterna förlorar det erhållna svaret, är det därför nödvändigt att förbättra den terapeutiska profilen för CAR-T-cellterapi genom att öka dess effektivitet och minska dess toxicitet. Båda dessa strategier är kopplade till förståelsen av resistensmekanismerna hos neoplastiska celler, såväl som till CAR-T-cellers biologi och alla de cellulära (mikromiljö) och icke-cellulära system som de interagerar med.

Vikten av studien ligger i undersökningarna som syftar till att förstå de möjliga strategierna som gör att den neoplastiska cellen kan undvika mekanismerna för CAR-T-medierad cytotoxicitet och/eller förändra antigenets struktur, vilket gör det funktionellt "osynligt" för interaktionen med bilen ; det kommer därmed att vara möjligt att identifiera mekanismer för resistens mot behandling med CAR-T-celler. En annan stark punkt i studien representeras av enkelcellssekvensering för att identifiera subpopulationer av lymfoida (CAR+ och CAR-) och myeloidceller relaterade till det kliniska resultatet (toxicitet och behandlingssvar).

Därför är de primära målen för studien:

• Genomiska studier i perifera blodprover tagna från patienter som drabbats av hematologiska maligniteter som genomgår CAR-T-cellterapi, för att identifiera korrelationer mellan neoplastiska cellsignaturer och respons på terapi (utvärderad enligt laboratorie- och instrumentstandard).
• Studie av CAR+ och CAR-lymfoida populationer och av myeloida populationer med encelliga RNA-sekvenseringsplattformar i perifera blodprover för att förstå den cellulära dynamiken relaterad till kliniska resultat såsom respons på terapi (utvärderad enligt laboratorie- och instrumentstandarder) och negativa effekter händelser (CRS, ICANS, sHLH, koagulopati, cytopenier och autoimmuna dyskrasier).

Tumörprofilering kommer att resultera i kinetiken för allelfrekvensen för variantspecifika gener (VAF) (identifierad genom NGS-sekvensering av fritt DNA som cirkulerar) hos patienter med olika kliniska resultat (svar eller motståndskraft mot behandling med CAR-T-terapi). Enkelcellig RNA-sekvensering (scRNAseq) kommer att mata ut värden för genöverflöd och cellkluster (subpopulationer av CAR+ och CAR-lymfoida celler och myeloidceller) samtidigt med händelser som anses relevanta i patientens kliniska historia, såsom förekomsten av toxicitet och förlust eller upprätthållande av svar på behandlingen, för att fastställa möjliga samband.

Studien kommer att föreslås för alla patienter i åldern ≥ 18 år som genomgår CAR-T-cellinfusion vid Departmental Program of Advanced Cellular Therapies vid IRCCS AOU i Bologna, cirka 50 patienter per år för totalt 150 patienter.

Perifera blodprover kommer att användas för att utföra studien kommer att hämtas vid följande tidpunkter:

• till aferes;
• vid inträde på avdelningen;
• per dag -1;
• på dag 0 (2 timmar efter infusion);
• per dag +1, +3, +5, +7, +9, +11, +13, +30, +90, +180, +365;

Provtagningen av vävnader sammanfaller med provtagningen som representerar den nuvarande standarden i rutinmässig klinisk praxis hos patienten som genomgår CAR-T-terapi:

proverna kommer att erhållas utan att de regelbundet planerade assistansprocedurerna (diagnostisk-terapeutiska) ogiltigförklaras.