Molekyyligeneettinen karakterisointi potilailla, joille tehdään CAR-T-soluinfuusio (CAR_22)

Viime vuosina yhä edistyneempien ex vivo -soluviljelyn ja solujen muokkauksen menetelmien soveltaminen on mahdollistanut uusien soluterapeuttisten alustojen kehittämisen, mukaan lukien "CAR (Chimeric Antigen Receptor) - T-soluterapia". CAR-T-soluterapia on terapia, jossa käytetään T-lymfosyyttejä, jotka on suunniteltu ilmentämään tiettyä antigeeniä vastaan ​​suunnattua kimeeristä reseptoria, joka on teoriassa sovellettavissa kaikkien kasvainten hoitoon, mutta jota käytetään tällä hetkellä laajemmin hematologisten pahanlaatuisten kasvainten hoidossa. Yksi CAR-T-soluterapian innovatiivisimmista näkökohdista on elävät lääkkeet, solut, jotka toimivat lääkkeenä sekä keinona rakentaa spesifinen immuniteetti kasvainta vastaan.

CAR-T-soluterapiaohjelma on jaettu kolmeen peruskohtaan:

• lymfosyyttien kerääminen (afereesilla), jotka on tarkoitettu suunnitteluprosessiin;
• valmistus, joka tähtää kerättyjen lymfosyyttien muuntamiseen ja laajentamiseen;
• solutuotteen infuusio lymfodepletoivan kemoterapian jälkeen.

Tämän terapian etuja edustaa siksi mahdollisuus tankata potilaan immuniteetti, joka on puutteellinen neoplastisen taudin hallinnassa, lymfosyyteillä, jotka kykenevät ilmentämään antineoplastista aktiivisuutta mekanismeilla, jotka eivät ole HLA-välitteisen antigeenin tunnistusrajoituksen alaisia.

Tällä hetkellä Euroopan unionin ja Italian myyntilupa (MA) mahdollistaa toisen sukupolven kimeerisiin rakenteisiin perustuvien anti-CD19 CAR-T -solujen hoitojen käytön:

• tisagenlecleucel (Kymriah): lapsipotilaat ja alle 25-vuotiaat nuoret aikuiset, joilla on B-solujen akuutti lymfoblastinen leukemia (ALL), joka on refraktorinen, uusiutuu transplantaation jälkeen tai toisessa tai toisessa uusiutumisessa; aikuispotilaat, joilla on diffuusi lymfooma relapsoitunut tai refraktiivinen suuri B-solu (DLBCL) kahden tai useamman systeemisen hoitolinjan jälkeen; aikuispotilaat, joilla on uusiutunut tai refraktaarinen follikulaarinen lymfooma (LF) kahden tai useamman systeemisen hoitosarjan jälkeen.
• aksikabtageenisiloleucel (Yescarta): aikuispotilaat, joilla on diffuusi suuri lymfooma B-solu (DLBCL) ja primaarinen mediastinumin lymfooma refraktaarisia tai uusiutuvia suuria B-soluja (PMBCL) kahden tai useamman systeemisen hoitosarjan jälkeen; aikuispotilailla, joilla on refraktaarinen tai uusiutunut follikulaarinen lymfooma (FL) kolmen tai useamman systeemisen hoitosarjan jälkeen.
• breksukabtageeniautoleucel (Tecartus): Aikuiset potilaat, joilla on solulymfoomavaippasairaus (MCL) uusiutuivat tai ovat refraktaarisia kahden tai useamman systeemisen hoidon jälkeen, mukaan lukien Brutonin tyrosiinikinaasin estäjä. Lisokabtageenimaraleucelin (Breyanzi) myyntilupa odotetaan pian diffuusin suurten B-solujen lymfooman (DLBCL), primaarisen välikarsinan suurten B-solujen lymfooman (PMBCL) ja follikulaarisen lymfooman (LF) aste 3B, refraktaarisen tai uusiutuvan, hoitoon.

CAR-T-hoitojen käyttö ei kuitenkaan ole vapaa mahdollisesti vakavista ja joskus kuolemaan johtavista haittatapahtumista; myrkyllisyysprofiilissa seuraavat tunnistetaan omituisiksi:

• sytokiinien vapautumisoireyhtymä (CRS)
• B-soluaplasia (hypogammaglobulinemia)
• neurologiset haittavaikutukset
• hematologinen toksisuus
• infektiot. Siksi, kun otetaan huomioon, että toisaalta haittatapahtumat eivät ole vähäpätöisiä ja toisaalta, että yli 50 % potilaista menettää saadun vasteen, on välttämätöntä parantaa CAR-T-soluhoidon terapeuttista profiilia lisäämällä sen tehoa ja tehoa. vähentää sen myrkyllisyyttä. Molemmat strategiat liittyvät neoplastisten solujen resistenssimekanismien ymmärtämiseen sekä CAR-T-solujen ja kaikkien niiden solujen (mikroympäristö) ja ei-solujärjestelmien biologiaan, joiden kanssa ne ovat vuorovaikutuksessa.

Tutkimuksen merkitys on tutkimuksissa, joilla pyritään ymmärtämään mahdollisia strategioita, joiden avulla neoplastinen solu voi kiertää CAR-T-välitteisen sytotoksisuuden mekanismeja ja/tai muuttaa antigeenin rakennetta tehden siitä toiminnallisesti "näkymättömän" vuorovaikutukselle CAR ; täten on mahdollista tunnistaa CAR-T-soluilla suoritettavalle hoidolle vastustuskyvyn mekanismeja. Toinen tutkimuksen vahva kohta on yksisoluinen sekvensointi kliiniseen lopputulokseen (toksisuus ja hoitovaste) liittyvien lymfoidisolujen (CAR+ ja CAR-) ja myeloidisolujen alapopulaatioiden tunnistamiseksi.

Siksi tutkimuksen ensisijaiset tavoitteet ovat:

• Genomitutkimukset perifeerisistä verinäytteistä, jotka on otettu potilailta, joilla on hematologisia pahanlaatuisia kasvaimia, jotka saavat CAR-T-soluhoitoa, jotta voidaan tunnistaa korrelaatioita neoplastisten solujen allekirjoitusten ja hoitovasteen välillä (arvioitu laboratorio- ja instrumenttistandardien mukaisesti).
• Tutkimus CAR+- ja CAR-lymfoidipopulaatioista ja myelooisista populaatioista, joissa on yksisoluisen RNA:n sekvensointialustoja perifeerisissä verinäytteissä, jotta voidaan ymmärtää kliinisiin tuloksiin liittyvää soludynamiikkaa, kuten hoitovastetta (arvioitu laboratorio- ja instrumenttistandardien mukaisesti) ja haittavaikutuksia. tapahtumat (CRS, ICANS, sHLH, koagulopatia, sytopeniat ja autoimmuunidyskrasiat).

Kasvainprofilointi johtaa muunnosspesifisten geenien (VAF:ien) alleelitaajuuden kinetiikkaan (tunnistetaan kiertävän vapaan DNA:n NGS-sekvensoinnilla) potilailla, joilla on erilainen kliininen lopputulos (vaste tai refraktiorisuus CAR-T-hoitoon). Yksisoluinen RNA-sekvensointi (scRNAseq) tulostaa geenien runsausarvoja ja soluklustereita (CAR+- ja CAR-lymfoidisolujen ja myelooisten solujen alapopulaatioita) samanaikaisesti potilaan kliinisen historian kannalta merkityksellisiksi katsottujen tapahtumien kanssa, kuten toksisuuden esiintyminen ja verisolujen menetys tai ylläpito. hoitovastetta mahdollisten korrelaatioiden selvittämiseksi.

Tutkimusta ehdotetaan kaikille ≥ 18-vuotiaille potilaille, joille tehdään CAR-T-soluinfuusio Bolognan IRCCS AOU:n kehittyneiden soluhoitojen osastoon, noin 50 potilaalle vuodessa, yhteensä 150 potilasta.

Tutkimuksen suorittamiseen käytetään perifeerisiä verinäytteitä, jotka otetaan seuraavina aikoina:

• afereesiin;
• osastolle saapuessaan;
• päivässä -1;
• päivänä 0 (2 tuntia infuusion jälkeen);
• päivässä +1, +3, +5, +7, +9, +11, +13, +30, +90, +180, +365;

Kudosnäytteenotto osuu näytteenottoon, joka edustaa nykyistä standardia rutiininomaisessa kliinisessä käytännössä CAR-T-hoitoa saavalle potilaalle:

näytteet otetaan mitätöimättä säännöllisesti suunniteltuja avustustoimenpiteitä (diagnostiikka-terapeuttisia).