ARDS 患者における NMR に基づくメタボロミクス動態

この研究では、すべての成人 ICU 患者が ARDS のスクリーニングを受けます。 軽度の ARDS (PaO2/FiO2 200 ～ 300) の基準を満たす参加者は、参加の可能性があると考慮されます。 比較分析のために、年齢が一致した健康な対照も研究に含まれます。 研究者らは、軽度のARDSを患う参加者から採取した血液サンプルの研究を計画している。 最初のサンプルは、軽度のARDSの診断基準を満たしてから72時間以内に収集され、その後は参加者がARDSから回復するかICUから退院するか、または参加後3週間のいずれか早い方まで72時間ごとに収集されます。 血清の調製では、2 ml の血液サンプルを採取バイアルに採取し、室温で 60 分間凝固させます。 次に、サンプルを 1,200 × g で 10 分間遠心分離し、エッペンドルフ チューブに収集し、密封して、NMR 実験を行うまでマイナス 80 度で冷凍します。 さらに、1D および 2D NMR 分光技術は、血清のさまざまな代謝成分の特性評価と定量に使用されます。

この研究は本質的に、ARDS 集団における NMR に基づくメタボロミクスの動態を理解するための探索的なものです。 軽度の ARDS の約 20 ～ 25% が最終的に重度の ARDS に進行することを考慮し、研究者には合計 120 人の参加者 (健康な参加者を含む) が含まれる予定です。 人口統計学的プロフィール、臨床的特徴、疾患重症度スコアを把握するためのデータ収集が行われます。研究参加時の逐次臓器不全評価（SOFA）スコア、ICU滞在中の臨床経過、および参加者の転帰が行われます。

サンプルの NMR 分光法 (800-MHz Bruker) は、シグナルをロックするためにトリメチルシリルプロパン酸 (TSP)、D2O を含む外部チューブを使用して実行されます。 血漿/血清サンプルを解凍し、その後 10,000g、4℃で 5 分間遠心分離して固形破片を除去します。各サンプル 450 μl を 50 μl の NMR バッファー (1.5 MKH2PO4、2 mM NaN3、5.8 mM) と完全に混合します。 mM ナトリウム 3-(トリメチルシリル) プロピオネート-2,2,3,3-d4、D2O、pH 7.4) を加え、得られた溶液を 5 mm または 3 mm NMR チューブに移します。 水抑制を伴うすべての一次元スペクトルが得られます。 プロトンスペクトルはTSP信号を参照します(δ=0.00 ppm）。 自由誘導減衰 (FID) は、フーリエ変換の前に線幅拡大とゼロ埋めで処理されます。 取得されたスペクトルは手動で位相調整されます。 TOPSPIN 2.1 を使用してベースラインを修正し、統合しました。

すべての NMR スペクトルは TOPSIN 3 パッケージを使用して処理および分析されます。 自動および監視付きピークピッキングは Amix を使用して実行され、代謝物の同定は Metaboanlayst および BIOREFCODE 代謝物のデータベースを使用して行われます。 標準的な統計的教師ありおよび教師なし多変量解析 (PCA および PLSDA) が実行されます。

血清サンプルの 1H NMR スペクトルの代謝物は、1D、2D、HMDB、および BMRB データベースを使用して割り当てられます。 1D スペクトルに存在する小さな代謝物の重複共鳴は、異核単一量子相関 (HSQC)、相関分光法 (COSY)、全相関分光法 (TOCSY)、J 分解能 (JRES)、ヒト メタボローム データベースおよび生物学的磁気を含む 2D スペクトルを使用して確認されます。レゾナンスバンク (BMRB) データベース。