Cinétique métabolomique basée sur la RMN chez les patients atteints de SDRA

Pour cette étude, tous les patients adultes en soins intensifs seront dépistés pour le SDRA. Les participants qui remplissent les critères de SDRA léger (PaO2/FiO2 200-300) seront pris en compte pour une éventuelle inclusion. Pour une analyse comparative, un contrôle sain correspondant à l'âge sera également inclus dans l'étude. Les enquêteurs prévoient de travailler sur les échantillons de sang prélevés sur les participants atteints d'un SDRA léger. Les premiers échantillons seront collectés dans les 72 heures suivant la satisfaction des critères de diagnostic du SDRA léger, puis toutes les 72 heures jusqu'à ce que les participants se rétablissent du SDRA ou quittent l'USI ou trois semaines après l'inclusion, selon la première éventualité. Pour la préparation du sérum, 2 ml d'échantillons de sang seront obtenus dans un flacon de prélèvement, laissés coaguler pendant 60 minutes à température ambiante. Les échantillons seront ensuite centrifugés à 1 200 × g pendant 10 minutes, collectés dans des tubes Eppendorf, scellés et congelés à moins 80 degrés Celsius jusqu'à ce que des expériences RMN soient réalisées. D'autres techniques spectroscopiques RMN 1D et 2D seront utilisées pour la caractérisation et la quantification de divers composants métaboliques du sérum.

Cette étude est de nature exploratoire pour comprendre la cinétique de la métabolomique basée sur la RMN dans la population SDRA. Considérant qu'environ 20 à 25 % des SDRA légers finiront par évoluer vers un SDRA sévère, les enquêteurs incluront un total de 120 participants (y compris des participants en bonne santé). Collecte de données pour comprendre le profil démographique, les caractéristiques cliniques et le score de gravité de la maladie Le score d'évaluation séquentielle des défaillances d'organes (SOFA) au moment de l'inclusion de l'étude, l'évolution clinique pendant le séjour en soins intensifs et les résultats des participants seront effectués.

La spectroscopie RMN (Bruker 800 MHz) de l'échantillon sera réalisée à l'aide d'un tube externe contenant de l'acide triméthylsilyl propanoïque (TSP), D2O pour verrouiller le signal. Les échantillons de plasma/sérum seront décongelés puis centrifugés à 10 000 g pendant 5 min à 4°C pour éliminer tout débris solide, 450 μl de chaque échantillon seront soigneusement mélangés avec 50 μl de tampon RMN (1,5 MKH2PO4, 2 mM NaN3, 5,8 mM sodium 3-(triméthylsilyl) propionate-2,2,3,3-d4, D2O, pH 7,4) et la solution résultante sera transférée dans des tubes RMN de 5 mm ou 3 mm. Tous les spectres unidimensionnels avec suppression d'eau seront obtenus. Les spectres de protons seront référencés au signal TSP (δ=0,00 ppm). Les désintégrations par induction libre (FID) seront traitées avec un élargissement de ligne et un remplissage par zéro avant la transformation de Fourier. Les spectres acquis seront mis en phase manuellement ; ligne de base corrigée et intégrée à l’aide de TOPSPIN 2.1.

Tous les spectres RMN seront traités et analysés à l'aide du package TOPSIN 3. La sélection automatique et supervisée des pics sera effectuée avec Amix et l'identification des métabolites sera effectuée à l'aide de la base de données Metaboanlayst et BIOREFCODE des métabolites. Une analyse statistique multivariée standard supervisée et non supervisée (PCA et PLSDA) sera effectuée.

Les métabolites dans les spectres RMN 1H des échantillons de sérum seront attribués à l'aide des bases de données 1D, 2D, HMDB et BMRB. Les résonances chevauchantes des petits métabolites présentes dans le spectre 1D seront confirmées à l'aide de spectres 2D comprenant la corrélation quantique unique hétéronucléaire (HSQC), la spectroscopie de corrélation (COSY), la spectroscopie de corrélation totale (TOCSY), la résolution J (JRES) et la base de données du métabolisme humain et le magnétique biologique. base de données des banques de résonance (BMRB).