NMR-baseret metabolomisk kinetik hos ARDS-patienter

Til denne undersøgelse vil alle voksne ICU-patienter blive screenet for ARDS. Deltagere, der opfylder kriterierne for mild ARDS (PaO2/FiO2 200-300), vil blive overvejet for eventuel inklusion. Til sammenlignende analyse vil aldersmatchet sund kontrol også blive inkluderet i undersøgelsen. Efterforskere planlægger at arbejde på de blodprøver, der er indsamlet fra deltagere med mild ARDS. De første prøver vil blive indsamlet inden for 72 timer efter opfyldelse af diagnostiske kriterier for mild ARDS, derefter hver 72. time, indtil deltagerne er kommet sig over ARDS eller udskrives fra intensivafdelingen eller tre uger efter inklusion, alt efter hvad der kommer først. Til serumforberedelse opnås 2 ml blodprøver i et opsamlingshætteglas, som får lov til at størkne i 60 minutter ved stuetemperatur. Prøverne vil derefter blive centrifugeret ved 1.200 × g i 10 minutter, opsamlet i et eppendorf-rør, forseglet og frosset ved minus 80 grader Celsius, indtil NMR-eksperimenter ville blive udført. Yderligere 1D og 2D NMR spektroskopiske teknikker vil blive brugt til karakterisering og kvantificering af forskellige metaboliske komponenter i serum.

Denne undersøgelse er af undersøgende karakter for at forstå kinetikken af ​​NMR-baseret metabolomik i ARDS-populationen. I betragtning af at cirka 20-25 % af mild ARDS i sidste ende vil udvikle sig til svær ARDS, vil efterforskerne omfatte i alt 120 deltagere (inklusive raske deltagere). Dataindsamling for at forstå demografisk profil, kliniske karakteristika og sygdoms sværhedsgrad score Sequential Organ Failure Assessment (SOFA) score på tidspunktet for undersøgelsens inklusion, klinisk forløb under intensivophold og deltagernes resultat vil blive udført.

NMR-spektroskopi (800-MHz Bruker) af prøven vil blive udført ved hjælp af et eksternt rør indeholdende Trimethylsilylpropansyre (TSP), D2O for at låse signalet. Plasma/serumprøver vil blive optøet og efterfølgende centrifugeret ved 10.000 g i 5 minutter ved 4°C for at fjerne faste rester. 450 μl af hver prøve vil blive grundigt blandet med 50 μl NMR-buffer (1,5 MKH2PO4, 2 mM NaN83. mM natrium-3-(trimethylsilyl)propionat-2,2,3,3-d4, D2O, pH 7,4), og den resulterende opløsning overføres til 5 mm eller 3 mm NMR-rør. Alle endimensionelle spektre med vandundertrykkelse vil blive opnået. Protonspektre vil blive refereret til TSP-signalet (δ=0,00 ppm). De frie induktionshenfald (FID'er) vil blive behandlet med linjeudvidelse og nul udfyldt før Fourier-transformation. De erhvervede spektre vil blive faset manuelt; baseline korrigeret og integreret ved hjælp af TOPSPIN 2.1.

Alle NMR-spektre vil blive behandlet og analyseret ved hjælp af TOPSIN 3-pakken. Automatisk og overvåget topplukning vil blive udført med Amix, og metabolitteridentifikation vil blive udført ved hjælp af Metaboanlayst og BIOREFCODE database over metabolitter. Standard statistisk overvåget og uovervåget multivariat analyse (PCA og PLSDA) vil blive udført.

Metabolitter i 1H NMR-spektrene af serumprøver vil blive tildelt ved hjælp af 1D, 2D, HMDB og BMRB database. Små metabolitoverlappende resonanser til stede i 1D-spektrum vil blive bekræftet ved at bruge 2D-spektre inklusive heteronukleær enkelt kvantekorrelation (HSQC), korrelationsspektroskopi (COSY), Total korrelationsspektroskopi (TOCSY), J-opløst (JRES) og Human Metabolome Database og Biologisk magnetisk Resonance Bank (BMRB) database.