ARDS 환자의 NMR 기반 대사체 역학

이 연구를 위해 모든 성인 ICU 환자는 ARDS에 대한 선별검사를 받게 됩니다. 가벼운 ARDS(PaO2/FiO2 200-300) 기준을 충족하는 참가자는 포함 가능성이 고려됩니다. 비교 분석을 위해 연령에 맞는 건강한 대조군도 연구에 포함될 것입니다. 조사관들은 경미한 ARDS를 앓고 있는 참가자들로부터 수집한 혈액 샘플을 연구할 계획입니다. 첫 번째 샘플은 경증 ARDS의 진단 기준을 충족한 후 72시간 이내에 수집되며, 그 후 참가자가 ARDS에서 회복되거나 ICU에서 퇴원할 때까지 또는 포함 후 3주 중 먼저 도래하는 시점까지 72시간마다 수집됩니다. 혈청 준비를 위해 혈액 샘플 2ml를 수집 바이알에 담아 실온에서 60분간 응고시킵니다. 그런 다음 샘플을 1,200 x g에서 10분간 원심분리하고 에펜도르프 튜브에 수집한 다음 밀봉하고 NMR 실험이 수행될 때까지 영하 80도에서 냉동합니다. 추가로 1D 및 2D NMR 분광 기술을 사용하여 혈청의 다양한 대사 성분을 특성화하고 정량화합니다.

이 연구는 본질적으로 ARDS 집단에서 NMR 기반 대사체학의 동역학을 이해하기 위한 탐색적 연구입니다. 경증 ARDS의 약 20~25%가 결국 중증 ARDS로 진행된다는 점을 고려하여 조사관에는 총 120명의 참가자(건강한 참가자 포함)가 포함됩니다. 인구통계학적 프로필, 임상 특성 및 질병 심각도 점수 연구 포함 시 SOFA(순차적 장기 부전 평가) 점수, ICU 체류 중 임상 과정 및 참가자 결과를 이해하기 위한 데이터 수집이 수행됩니다.

샘플의 NMR 분광법(800MHz Bruker)은 신호를 고정하기 위해 트리메틸실릴 프로판산(TSP), D2O가 포함된 외부 튜브를 사용하여 수행됩니다. 혈장/혈청 샘플을 해동한 후 4°C에서 5분간 10,000g으로 원심분리하여 고체 잔해를 제거합니다. 각 샘플 450μl를 NMR 완충액(1.5 MKH2PO4, 2mM NaN3, 5.8) 50μl와 완전히 혼합합니다. mM 나트륨 3-(트리메틸실릴) 프로피오네이트-2,2,3,3-d4, D2O, pH 7.4) 및 생성된 용액을 5mm 또는 3mm NMR 튜브로 옮깁니다. 수분 억제 기능을 갖춘 모든 1차원 스펙트럼을 얻을 수 있습니다. 양성자 스펙트럼은 TSP 신호(δ=0.00)를 기준으로 합니다. ppm). 자유 유도 붕괴(FID)는 푸리에 변환 전에 선 확장 및 0 채우기로 처리됩니다. 획득된 스펙트럼은 수동으로 단계적으로 조정됩니다. TOPSPIN 2.1을 사용하여 기준선을 수정하고 통합했습니다.

모든 NMR 스펙트럼은 TOPSIN 3 패키지를 사용하여 처리 및 분석됩니다. 자동 및 감독된 피크 선택은 Amix를 사용하여 수행되며 대사산물 식별은 Metaboanlayst 및 대사산물의 BIOREFCODE 데이터베이스를 사용하여 수행됩니다. 표준 통계 감독 및 비지도 다변량 분석(PCA 및 PLSDA)이 수행됩니다.

혈청 샘플의 1H NMR 스펙트럼의 대사산물은 1D, 2D, HMDB 및 BMRB 데이터베이스를 사용하여 할당됩니다. 1D 스펙트럼에 존재하는 작은 대사산물 중첩 공명은 이핵 단일 양자 상관관계(HSQC), 상관 분광법(COSY), 총 상관 분광법(TOCSY), J-분해(JRES), 인간 대사체 데이터베이스 및 생물학적 자기를 포함한 2D 스펙트럼을 사용하여 확인됩니다. 공명 뱅크(BMRB) 데이터베이스.