生殖補助医療における減数分裂紡錘体をスキャンして卵子の品質を評価する (SMART)

不妊治療の主な戦略の 1 つは体外受精 (IVF) です。 体外受精の成功率は、女性の年齢、卵子の質と成熟状態、精子の質など、いくつかの重要な要因によって影響されます。 数人の著者は、光学的に複屈折する減数分裂紡錘体 (MS) の存在、位置、および遅延が卵母細胞の発生能力に関連し、受精および胚発生の質に影響を与えると示唆しています。 正常な紡錘体形態を持つ卵母細胞は、目に見えないか異常な減数分裂紡錘体を持つ卵母細胞と比較して、正倍数体胚を産生する可能性が大幅に高くなります。 MSの形態に基づいて細胞質内精子注入（ICSI）のタイミングを調整することも提案されている。 極体 (PB) に対する MS の位置に基づいて ICSI の時間を調整すると、35 歳以上の女性の受精成功の確率が高まることが示されました。 35 歳以上の患者の卵母細胞の場合、培養時間が長いほど、より多くの卵母細胞が完全に成熟し (MII 期)、ICSI の準備が整います。 この状況では、MS ステータスは卵母細胞の未成熟度を示す重要な指標でした。

患者は、Research Electronic Data Capture (REDCap) を使用して 3 つのグループに無作為に割り当てられます。グループ 1、MS 画像処理を行わない標準的な ICSI。グループ 2、MS イメージングとそれに続く標準的な ICSI、グループ 3、MS イメージングと MS 状態に応じた ICSI 受精。 MS 評価を受けたグループ 3 の患者からの卵子は、MS の状態に応じて、採卵後 5 ～ 6 時間 (OPU) または OPU の 7 ～ 8 時間後に受精されます。 MS 評価を行わなかった卵子はすべて、OPU の 5 ～ 6 時間後に受精します。 ＭＳ評価は、パラフィンオイルで覆われたＨＥＰＥＳ緩衝液を含む約５μｌの培地を入れ、使用前に１時間加熱した、予め準備したガラス底ディッシュ中で行われる。 極体 (PB) と MS の両方がよく見えるように針を使用して卵母細胞を回転し、光学顕微鏡を使用して写真を撮影します。 MS ステータスと MS と PB の間の角度 (α) は、卵母細胞のピックアップ (OPU) の 3 ～ 4 時間後に取得されます。 同時に、偏光顕微鏡画像が取得されます (倍率 100 倍の偏光顕微鏡)。 特に、PB/MS が近接している (PB と MS の間の角度 < 5°)、または MS が見えないグループ 3 の患者の卵母細胞は、未熟卵母細胞として予測されます。 これらの卵母細胞の場合、ICSIは偏光顕微鏡評価の4〜5時間後、つまりOPUの7〜8時間後に実行されます。 MS がはっきりと見え、PB/MS が近接していない卵母細胞（PB と MS の間の角度 > 5°）の場合、ICSI は通常、偏光顕微鏡評価の 2 ～ 3 時間後、つまり OPU の 5 ～ 6 時間後に実行されます。 1 および 2 グループの患者。 ICSIは、ICSI/ホールディングマイクロピペット（Microtech IVF、チェコ共和国）、ポリビニルピロリドン（ICSI™、Vitrolife、スウェーデン）、およびサーモプレート（Tokaohit、日本）を備えたEppendorf（ハンブルク、ドイツ）のマイクロマニピュレーションシステムを使用して、標準プロトコルに従って実行されます。 卵母細胞は個別に培養され、その順序が保存されるため、他の結果 (タイムラプスからのデータ、臨床結果) を個々の卵母細胞と関連付けることができます。 また、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（hCG）投与から実際の受精が完了するまでの時間もモニタリングします。 ＯＰＵ後に卵母細胞を裸にし（ＨＹＡＳＥ－１０Ｘ（商標）、Ｖｉｔｒｏｌｉｆｅ、スウェーデン）、成熟段階を検査する。 胚胞（GV）期の卵母細胞は含まれません。 日本のメーカー Astec のタイムラプス培養器内の卵子と胚は、パラフィン オイル (OVOIL™、VITROLIFE、スウェーデン) の下、タイムラプス ディッシュ Origio、デンマーク Sage 1-Step™、Origio、デンマーク) で 37.0 °C、6% で培養されます。 CO2 と 5%O2。 ICSI 後の受精は、ICSI 後 16 ～ 20 時間で 2 つの前核と 2 つの極体の存在として定義されます。 胚は122〜144時間培養されます。

パイロット所見は、ランダム化対照試験で確認されます。つまり、ICSI タイミングを最適化するために、MS の可視性と極体に対する相対位置を卵母細胞成熟の指標として使用する効率が評価されます。