Skanning av meiotisk spindel i assistert reproduksjonsteknikk for å vurdere oocyttkvalitet (SMART)

En av hovedstrategiene for infertilitetsbehandling er in vitro fertilisering (IVF). IVF-suksessraten påvirkes av flere nøkkelfaktorer, inkludert kvinnenes alder, oocyttkvalitet og modningstilstand, samt sædkvalitet. Flere forfattere har antydet at tilstedeværelsen, posisjonen og retardansen til den optisk dobbeltbrytende meiotiske spindelen (MS) er relatert til oocyttutviklingskompetanse, noe som påvirker kvaliteten på befruktning og embryoutvikling. Oocytter med normal spindelmorfologi er betydelig mer sannsynlig å produsere euploide embryoer sammenlignet med oocytter med meiotiske spindler som ikke er synlige eller unormale. Justering av tidspunktet for intracytoplasmatisk spermieinjeksjon (ICSI) basert på MS-morfologi har også blitt foreslått. Det ble vist at justering av tiden for ICSI basert på MS-posisjonen i forhold til polarkroppen (PB) øker sannsynligheten for vellykket befruktning for kvinner over 35 år. For oocyttene til pasienter over 35 år gjorde den lengre inkubasjonstiden det mulig for et større antall oocytter å bli fullstendig modne (MII-fase) og forberedt for ICSI. I denne situasjonen var MS-status en viktig indikator på umodenhet av oocytter.

Pasienten vil bli randomisert i tre grupper ved hjelp av Research Electronic Data Capture (REDCap): gruppe 1, standard ICSI uten MS-avbildning; gruppe 2, MS-avbildning etterfulgt av standard ICSI, gruppe 3, MS-avbildning og ICSI-befruktning i henhold til MS-status. Oocytter fra gruppe 3-pasienter med MS-utredning vil bli befruktet i henhold til MS-status enten 5-6 timer etter ovum pick-up (OPU) eller 7-8 timer etter OPU. Oocytter uten MS-evaluering vil alle befruktes 5-6 timer etter OPU. MS-evaluering vil foregå i ferdige glassbunnsfat med ca. 5μl medium med HEPES-buffer dekket med parafinolje, varmet opp en time før bruk. Oocytten vil bli rotert med en nål slik at Polar Body (PB) og MS er godt synlige, og fotografier vil bli tatt med optisk mikroskop. MS-statusen og vinkelen (α) mellom MS og PB vil bli oppnådd 3-4 timer etter oocytthenting (OPU). Samtidig vil det polariserte lysmikroskopibildet bli anskaffet (polarisert lysmikroskopi ved × 100 forstørrelse. Spesielt for oocytter fra gruppe 3 pasienter med PB/MS i umiddelbar nærhet (vinkel mellom PB og MS < 5◦) eller MS som ikke er synlig vil bli predikert som umodne oocytter. For disse oocyttene vil ICSI bli utført 4-5 timer etter polarisasjonsmikroskopi-evalueringen, dvs. 7-8 timer etter OPU. For oocytter med MS godt synlig og PB/MS ikke i umiddelbar nærhet (vinkel mellom PB og MS > 5◦) vil ICSI utføres typisk 2-3 timer etter polarisasjonsmikroskopi-evalueringen, dvs. 5-6 timer etter OPU, som for pasienter fra 1 og 2 grupper. ICSI vil bli utført i henhold til standard protokoll ved bruk av ICSI/holdemikropipetter (Microtech IVF, Tsjekkia), polyvinylpyrrolidon (ICSI™, Vitrolife, Sverige) og Eppendorf (Hamburg, Tyskland) mikromanipulasjonssystem utstyrt med termoplate (Tokaohit, Japan). Oocyttene vil bli dyrket individuelt, og deres rekkefølge bevares, slik at de andre utfallene (data fra timelapse, kliniske resultater) kan assosieres med individuelle oocytter. Vi vil også overvåke tiden fra administrering av humant koriongonadotropin (hCG) til fullføring av selve befruktningen. Oocyttene vil bli blottet (HYASE-10X™, Vitrolife, Sverige) etter OPU, og modningsstadiet vil bli undersøkt. Germinal vesikkel (GV) stadium oocytt vil ikke bli inkludert. Oocytter og embryoer i time-lapse-inkubator fra den japanske produsenten Astec vil bli dyrket i en timelapse-skål Origio, Danmark Sage 1-Step™, Origio, Danmark under parafinolje (OVOIL™, VITROLIFE, Sverige) ved 37,0 °C, 6 % CO2 og 5 % O2. Befruktning etter ICSI vil bli definert som tilstedeværelsen av to pronuklei og 2 polare kropper 16-20 timer etter ICSI. Embryoer vil bli dyrket i 122-144 timer.

Pilotfunn vil bli bekreftet i et randomisert kontrollforsøk, dvs. effektiviteten av å bruke MS-synlighet og relativ posisjon til polarkroppen som indikatorer på oocyttmodning for å optimalisere ICSI-timing vil bli evaluert.