Balayage du fuseau méiotique dans les techniques de procréation assistée pour évaluer la qualité des ovocytes (SMART)

L'une des principales stratégies de traitement de l'infertilité est la fécondation in vitro (FIV) . Le taux de réussite de la FIV est affecté par plusieurs facteurs clés, notamment l'âge des femmes, la qualité et l'état de maturation des ovocytes, ainsi que la qualité du sperme. Plusieurs auteurs ont suggéré que la présence, la position et le retard du fuseau méiotique (MS) optiquement biréfringent sont liés à la compétence de développement des ovocytes, affectant la qualité de la fécondation et le développement de l'embryon. Les ovocytes ayant une morphologie de fuseau normal sont significativement plus susceptibles de produire des embryons euploïdes que les ovocytes dont le fuseau méiotique n'est pas visible ou anormal. L'ajustement du moment de l'injection intracytoplasmique des spermatozoïdes (ICSI) en fonction de la morphologie de la SEP a également été proposé. Il a été démontré que l'ajustement du moment de l'ICSI en fonction de la position du MS par rapport au corps polaire (PB) augmente la probabilité de fécondation réussie pour les femmes de plus de 35 ans. Pour les ovocytes des patientes de plus de 35 ans, le temps d'incubation plus long a permis à un plus grand nombre d'ovocytes d'atteindre leur pleine maturité (phase MII) et de se préparer à l'ICSI. Dans cette situation, le statut MS était un indicateur important de l’immaturité des ovules.

Le patient sera randomisé en trois groupes à l'aide de la capture électronique de données de recherche (REDCap) : groupe 1, ICSI standard sans imagerie MS ; groupe 2, imagerie MS suivie d'une ICSI standard, groupe 3, imagerie MS et fécondation ICSI selon le statut MS. Les ovocytes des patients du groupe 3 avec évaluation de la SEP seront fécondés selon le statut de la SEP soit 5 à 6 heures après le prélèvement de l'ovule (OPU) ou 7 à 8 heures après l'OPU. Les ovocytes sans évaluation MS seront tous fécondés 5 à 6 heures après l'OPU. L'évaluation MS aura lieu dans des plats à fond de verre pré-préparés avec environ 5 µl de milieu avec le tampon HEPES recouvert d'huile de paraffine, mis à chauffer une heure avant utilisation. L'ovocyte sera mis en rotation à l'aide d'une aiguille afin que le corps polaire (PB) et la MS soient tous deux bien visibles, et les photographies seront prises à l'aide d'un microscope optique. Le statut MS et l'angle (α) entre MS et PB seront obtenus 3 à 4 heures après le prélèvement des ovocytes (OPU). Dans le même temps, l'image de microscopie en lumière polarisée sera acquise (microscopie en lumière polarisée à un grossissement ×100. En particulier, pour les ovocytes du groupe 3, les patients présentant une PB/MS à proximité immédiate (angle entre PB et MS < 5◦) ou une MS non visible seront prédits comme des ovocytes immatures. Pour ces ovocytes, l'ICSI sera réalisée 4 à 5 h après l'évaluation en microscopie polarisation, soit 7 à 8 h après l'OPU. Pour les ovocytes avec MS clairement visible et PB/MS pas à proximité (angle entre PB et MS > 5◦), l'ICSI sera réalisée généralement 2 à 3 h après l'évaluation en microscopie de polarisation, soit 5 à 6 h après l'OPU, comme pour patients des groupes 1 et 2. L'ICSI sera réalisée selon le protocole standard en utilisant des micropipettes ICSI/holding (Microtech IVF, République tchèque), de la polyvinylpyrrolidone (ICSI™, Vitrolife, Suède) et du système de micromanipulation Eppendorf (Hambourg, Allemagne) équipé d'une thermoplaque (Tokaohit, Japon). Les ovocytes seront cultivés individuellement et leur ordre préservé, afin que les autres résultats (données timelapse, résultats cliniques) puissent être associés à des ovocytes individuels. Nous surveillerons également le temps écoulé entre l'administration de la gonadotrophine chorionique humaine (hCG) et la fin de la fécondation proprement dite. Les ovocytes seront dénudés (HYASE-10X™, Vitrolife, Suède) après OPU, et le stade de maturation sera examiné. L'ovocyte au stade vésicule germinale (GV) ne sera pas inclus. Les ovocytes et embryons en incubateur time-lapse du fabricant japonais Astec seront cultivés dans une boîte timelapse Origio, Danemark Sage 1-Step™, Origio, Danemark sous huile de paraffine (OVOIL™, VITROLIFE, Suède) à 37,0 °C, 6% CO2 et 5%O2. La fécondation après ICSI sera définie comme la présence de deux pronoyaux et de 2 globules polaires 16 à 20 h après l'ICSI. Les embryons seront cultivés pendant 122 à 144 h.

Les résultats pilotes seront confirmés dans un essai contrôlé randomisé, c'est-à-dire que l'efficacité de l'utilisation de la visibilité MS et de la position relative par rapport au corps polaire comme indicateurs de la maturation des ovocytes afin d'optimiser le timing ICSI sera évaluée.