Varredura do fuso meiótico em técnicas de reprodução assistida para avaliar a qualidade do oócito (SMART)

Uma das principais estratégias de tratamento da infertilidade é a fertilização in vitro (FIV). A taxa de sucesso da fertilização in vitro é afetada por vários fatores-chave, incluindo a idade das mulheres, a qualidade dos oócitos e o estado de maturação, bem como a qualidade do esperma. Vários autores sugeriram que a presença, posição e retardo do fuso meiótico opticamente birrefringente (MS) estão relacionados à competência de desenvolvimento do oócito, afetando a qualidade da fertilização e o desenvolvimento embrionário. Oócitos com morfologia de fuso normal têm probabilidade significativamente maior de produzir embriões euploides em comparação com oócitos com fusos meióticos que não são visíveis ou anormais. Ajustar o momento da injeção intracitoplasmática de espermatozóides (ICSI) com base na morfologia da EM também foi proposto. Foi demonstrado que o ajuste do tempo de ICSI com base na posição do MS em relação ao corpo polar (PB) aumenta a probabilidade de fertilização bem-sucedida para mulheres com mais de 35 anos de idade. Para os oócitos de pacientes com mais de 35 anos de idade, o maior tempo de incubação permitiu que um maior número de oócitos se tornassem totalmente maduros (fase MII) e preparados para ICSI. Nesta situação, o estado de MS foi um importante indicador de imaturidade oocitária.

O paciente será randomizado em três grupos usando Research Electronic Data Capture (REDCap): grupo 1, ICSI padrão sem imagem de MS; grupo 2, imagem MS seguida por ICSI padrão, grupo 3, imagem MS e fertilização ICSI de acordo com o status de MS. Os oócitos dos pacientes do grupo 3 com avaliação de EM serão fertilizados de acordo com o status de EM 5-6 horas após a coleta do óvulo (OPU) ou 7-8 horas após OPU. Os oócitos sem avaliação de MS serão fertilizados 5-6 horas após a OPU. A avaliação da MS será realizada em placas pré-preparadas com fundo de vidro com cerca de 5μl de meio com tampão HEPES coberto com óleo de parafina, colocadas para aquecer uma hora antes do uso. O ovócito será girado com uma agulha para que o Corpo Polar (PB) e o MS fiquem bem visíveis, e as fotografias serão tiradas em microscópio óptico. O status de MS e o ângulo (α) entre MS e PB serão obtidos 3-4 horas após a coleta do oócito (OPU). Ao mesmo tempo, será adquirida a imagem de microscopia de luz polarizada (microscopia de luz polarizada com ampliação de ×100). Especialmente, para oócitos de pacientes do grupo 3 com PB/MS próximos (ângulo entre PB e MS < 5◦) ou MS não visíveis serão previstos como oócitos imaturos. Para estes oócitos, a ICSI será realizada 4-5 horas após a avaliação da microscopia de polarização, ou seja, 7-8 horas após a OPU. Para oócitos com MS claramente visível e PB/MS não muito próximos (ângulo entre PB e MS > 5◦), a ICSI será realizada normalmente 2-3 h após a avaliação por microscopia de polarização, ou seja, 5-6 h após OPU, como para pacientes dos grupos 1 e 2. ICSI será realizada de acordo com o protocolo padrão usando micropipetas ICSI/holding (Microtech IVF, República Tcheca), polivinilpirrolidona (ICSI™, Vitrolife, Suécia) e sistema de micromanipulação Eppendorf (Hamburgo, Alemanha) equipado com termoplaca (Tokaohit, Japão). Os oócitos serão cultivados individualmente, e sua ordem preservada, para que os demais desfechos (dados de timelapse, resultados clínicos) possam ser associados aos oócitos individuais. Também monitoraremos o tempo desde a administração da gonadotrofina coriônica humana (hCG) até a conclusão da fertilização propriamente dita. Os oócitos serão desnudados (HYASE-10X™, Vitrolife, Suécia) após a OPU, e o estágio de maturação será examinado. Ovócitos em estágio de Vesícula Germinal (GV) não serão incluídos. Oócitos e embriões em incubadora time-lapse do fabricante japonês Astec serão cultivados em placa timelapse Origio, Dinamarca Sage 1-Step™, Origio, Dinamarca sob óleo de parafina (OVOIL™, VITROLIFE, Suécia) a 37,0 °C, 6% CO2 e 5%O2. A fertilização após ICSI será definida como a presença de dois pronúcleos e 2 corpos polares 16-20 horas após ICSI. Os embriões serão cultivados por 122-144 h.

As descobertas piloto serão confirmadas em um ensaio de controle randomizado, ou seja, a eficiência do uso da visibilidade do MS e da posição relativa ao corpo polar como indicadores de maturação do oócito, a fim de otimizar o tempo de ICSI, será avaliada.