Scanning af den meiotiske spindel i assisterede reproduktionsteknikker for at vurdere oocytkvalitet (SMART)

En af hovedstrategierne for infertilitetsbehandling er in vitro fertilisering (IVF). Succesraten for IVF påvirkes af flere nøglefaktorer, herunder kvindernes alder, oocytkvalitet og modningstilstand samt sædkvalitet. Flere forfattere har foreslået, at tilstedeværelsen, positionen og retardansen af ​​den optisk dobbeltbrydende meiotiske spindel (MS) er relateret til oocyternes udviklingskompetence, hvilket påvirker kvaliteten af ​​befrugtning og embryoudvikling. Oocytter med normal spindelmorfologi er signifikant mere tilbøjelige til at producere euploide embryoner sammenlignet med oocytter med meiotiske spindler, der ikke er synlige eller unormale. Justering af tidspunktet for intracytoplasmatisk spermainjektion (ICSI) baseret på MS-morfologi er også blevet foreslået. Det blev vist, at justering af ICSI-tiden baseret på MS-positionen i forhold til den polære krop (PB) øger sandsynligheden for vellykket befrugtning for kvinder over 35 år. For oocytterne fra patienter over 35 år gjorde den længere inkubationstid det muligt for et større antal oocytter at blive fuldt modne (MII-fase) og forberedt til ICSI. I denne situation var MS-status en vigtig indikator for oocytumodenhed.

Patienten vil blive randomiseret i tre grupper ved hjælp af Research Electronic Data Capture (REDCap): gruppe 1, standard ICSI uden MS-billeddannelse; gruppe 2, MS-billeddannelse efterfulgt af standard ICSI, gruppe 3, MS-billeddannelse og ICSI-befrugtning i henhold til MS-status. Oocytter fra gruppe 3 patienter med MS-evaluering vil blive befrugtet i henhold til MS-status enten 5-6 timer efter ovum pick-up (OPU) eller 7-8 timer efter OPU. Oocytter uden MS-vurdering vil alle befrugtes 5-6 timer efter OPU. MS-evaluering vil finde sted i færdiglavede skåle med glasbund med ca. 5 μl medium med HEPES-bufferen dækket med paraffinolie, sat til opvarmning en time før brug. Oocytten vil blive roteret ved hjælp af en nål, så Polar Body (PB) og MS begge er godt synlige, og fotografier vil blive taget ved hjælp af optisk mikroskop. MS-status og vinklen (α) mellem MS og PB vil blive opnået 3-4 timer efter oocytopsamling (OPU). Samtidig vil det polariserede lys mikroskopi billede blive erhvervet (polariseret lys mikroskopi ved x 100 forstørrelse. Specielt for oocytter fra gruppe 3 vil patienter med PB/MS i umiddelbar nærhed (vinkel mellem PB og MS < 5◦) eller MS ikke synlig blive forudsagt som umodne oocytter. For disse oocytter vil ICSI blive udført 4-5 timer efter polarisationsmikroskopi-evalueringen, dvs. 7-8 timer efter OPU. For oocytter med MS klart synlig og PB/MS ikke i umiddelbar nærhed (vinkel mellem PB og MS > 5◦) vil ICSI blive udført typisk 2-3 timer efter polarisationsmikroskopi-evalueringen, dvs. 5-6 timer efter OPU, som for patienter fra 1 og 2 grupper. ICSI vil blive udført i henhold til standardprotokol ved hjælp af ICSI/holdende mikropipetter (Microtech IVF, Tjekkiet), polyvinylpyrrolidon (ICSI™, Vitrolife, Sverige) og Eppendorf (Hamburg, Tyskland) mikromanipulationssystem udstyret med termoplader (Tokaohit, Japan). Oocytterne vil blive dyrket individuelt, og deres rækkefølge bevares, så de øvrige resultater (data fra timelapse, kliniske resultater) kan associeres med individuelle oocytter. Vi vil også overvåge tiden fra administrationen af ​​humant choriongonadotropin (hCG) til afslutningen af ​​den faktiske befrugtning. Oocytterne vil blive blottet (HYASE-10X™, Vitrolife, Sverige) efter OPU, og modningsstadiet vil blive undersøgt. Germinal vesikel (GV) stadium oocyt vil ikke blive inkluderet. Oocytter og embryoner i time-lapse inkubator fra den japanske producent Astec vil blive dyrket i en timelapse skål Origio, Danmark Sage 1-Step™, Origio, Danmark under paraffinolie (OVOIL™, VITROLIFE, Sverige) ved 37,0 °C, 6 % CO2 og 5 % O2. Befrugtning efter ICSI vil blive defineret som tilstedeværelsen af ​​to pronuclei og 2 polære legeme 16-20 timer efter ICSI. Embryoer vil blive dyrket i 122-144 timer.

Pilotfund vil blive bekræftet i et randomiseret kontrolforsøg, dvs. at effektiviteten af ​​at bruge MS synlighed og relativ position til den polære krop som indikatorer for oocytmodning for at optimere ICSI-timing vil blive evalueret.