Сканирование мейотического веретена при методах вспомогательной репродукции для оценки качества ооцитов (SMART)

Одной из основных стратегий лечения бесплодия является экстракорпоральное оплодотворение (ЭКО). На успех ЭКО влияют несколько ключевых факторов, включая возраст женщины, качество и состояние созревания яйцеклеток, а также качество спермы. Некоторые авторы предположили, что наличие, положение и задержка оптически двойного лучепреломления мейотического веретена (MS) связаны с компетентностью развития ооцитов, влияя на качество оплодотворения и развитие эмбриона. Ооциты с нормальной морфологией веретена значительно чаще дают эуплоидные эмбрионы по сравнению с ооцитами с мейотическими веретенами, которые не видны или ненормальны. Также была предложена корректировка времени интрацитоплазматической инъекции сперматозоидов (ИКСИ) на основе морфологии рассеянного склероза. Показано, что корректировка времени ИКСИ в зависимости от положения МС относительно полярного тела (ПТ) увеличивает вероятность успешного оплодотворения у женщин старше 35 лет. Для ооцитов пациенток старше 35 лет более длительное время инкубации позволило большему количеству ооцитов стать полностью зрелыми (фаза MII) и подготовиться к ИКСИ. В этой ситуации статус МС был важным индикатором незрелости ооцита.

Пациенты будут рандомизированы на три группы с использованием исследовательского электронного сбора данных (REDCap): группа 1, стандартное ИКСИ без МС-визуализации; группа 2, визуализация МС с последующим стандартным ИКСИ, группа 3, визуализация МС и оплодотворение ИКСИ в соответствии со статусом МС. Ооциты от пациенток группы 3 с оценкой рассеянного склероза будут оплодотворены в зависимости от статуса рассеянного склероза либо через 5-6 часов после забора яйцеклетки (OPU), либо через 7-8 часов после OPU. Все ооциты без оценки MS будут оплодотворены через 5-6 часов после OPU. Оценка МС будет проводиться в заранее подготовленных чашках со стеклянным дном, содержащих около 5 мкл среды с буфером HEPES, покрытым парафиновым маслом, и поставленных нагреться за час до использования. Ооцит будет повернут с помощью иглы так, чтобы полярное тело (PB) и MS были хорошо видны, а фотографии будут сделаны с помощью оптического микроскопа. Статус MS и угол (α) между MS и PB будут получены через 3-4 часа после забора ооцитов (OPU). В то же время будет получено изображение, полученное микроскопией в поляризованном свете (микроскопия в поляризованном свете при увеличении ×100). В частности, ооциты от пациентов группы 3 с ПБ/МС, находящимися в непосредственной близости (угол между ПБ и МС < 5◦) или невидимым МС, будут прогнозироваться как незрелые ооциты. Для этих ооцитов ИКСИ будет проводиться через 4-5 часов после оценки поляризационной микроскопии, т. е. через 7-8 часов после OPU. Для ооцитов с четко видимым MS и PB/MS, расположенными не в непосредственной близости (угол между PB и MS > 5°), ИКСИ обычно проводят через 2–3 часа после оценки поляризационной микроскопии, т. е. через 5–6 часов после OPU, как и для пациенты 1 и 2 групп. ИКСИ будет проводиться в соответствии со стандартным протоколом с использованием микропипеток ИКСИ/холдинга (Microtech IVF, Чехия), поливинилпирролидона (ICSI™, Vitrolife, Швеция) и системы микроманипуляции Eppendorf (Гамбург, Германия), оснащенной термопланшетом (Tokaohit, Япония). Ооциты будут культивироваться индивидуально с сохранением их порядка, так что другие результаты (данные временных интервалов, клинические результаты) можно будет связать с отдельными ооцитами. Мы также будем контролировать время от введения хорионического гонадотропина человека (ХГЧ) до завершения фактического оплодотворения. Ооциты будут оголены (HYASE-10X™, Vitrolife, Швеция) после OPU и будет исследована стадия созревания. Ооцит на стадии зародышевого пузырька (GV) не будет включен. Ооциты и эмбрионы в покадровом инкубаторе японского производителя Astec будут культивировать в покадровой чашке Origio, Дания Sage 1-Step™, Origio, Дания под парафиновым маслом (OVOIL™, VITROLIFE, Швеция) при 37,0 °C, 6% CO2 и 5% O2. Оплодотворение после ИКСИ будет определяться как наличие двух пронуклеусов и 2 полярных телец через 16-20 часов после ИКСИ. Эмбрионы будут культивироваться в течение 122-144 часов.

Результаты пилотного проекта будут подтверждены в ходе рандомизированного контрольного исследования, т. е. будет оценена эффективность использования видимости МС и относительного положения по отношению к полярному тельцу в качестве показателей созревания ооцитов с целью оптимизации времени ИКСИ.