Escaneo del huso meiótico en técnicas de reproducción asistida para evaluar la calidad de los ovocitos (SMART)

Una de las principales estrategias del tratamiento de la infertilidad es la fertilización in vitro (FIV). La tasa de éxito de la FIV se ve afectada por varios factores clave, incluida la edad de las mujeres, la calidad de los ovocitos y el estado de maduración, así como la calidad del esperma. Varios autores han sugerido que la presencia, posición y retardo del huso meiótico (MS) ópticamente birrefringente están relacionados con la competencia de desarrollo de los ovocitos, afectando la calidad de la fertilización y el desarrollo embrionario. Los ovocitos con morfología de huso normal tienen significativamente más probabilidades de producir embriones euploides en comparación con los ovocitos con husos meióticos que no son visibles o anormales. También se ha propuesto ajustar el momento de la inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI) en función de la morfología de la EM. Se demostró que ajustar el tiempo de ICSI en función de la posición del MS con respecto al cuerpo polar (PB) aumenta la probabilidad de fertilización exitosa en mujeres mayores de 35 años. Para los ovocitos de pacientes mayores de 35 años, el mayor tiempo de incubación permitió que un mayor número de ovocitos maduraran completamente (fase MII) y se prepararan para ICSI. En esta situación, el estado de EM fue un indicador importante de la inmadurez de los ovocitos.

El paciente será asignado al azar a tres grupos utilizando la captura de datos electrónicos de investigación (REDCap): grupo 1, ICSI estándar sin imágenes de EM; grupo 2, imágenes de EM seguidas de ICSI estándar, grupo 3, imágenes de EM y fertilización con ICSI según el estado de la EM. Los ovocitos de pacientes del grupo 3 con evaluación de EM serán fertilizados según el estado de la EM, ya sea 5 a 6 horas después de la recogida del óvulo (OPU) o 7 a 8 horas después de la OPU. Todos los ovocitos sin evaluación de EM serán fertilizados 5-6 horas después de la OPU. La evaluación de MS se llevará a cabo en platos con fondo de vidrio preparados previamente con aproximadamente 5 μl de medio con el tampón HEPES cubierto con aceite de parafina, puesto a calentar una hora antes de su uso. El ovocito se rotará con una aguja para que el cuerpo polar (PB) y el MS sean bien visibles, y se tomarán fotografías con un microscopio óptico. El estado de MS y el ángulo (α) entre MS y PB se obtendrán 3-4 horas después de la recogida de ovocitos (OPU). Al mismo tiempo, se adquirirá la imagen de microscopía de luz polarizada (microscopía de luz polarizada con un aumento de ×100). Especialmente, para los ovocitos del grupo 3, los pacientes con PB/MS muy próximos (ángulo entre PB y MS < 5◦) o MS no visible se predecirán como ovocitos inmaduros. Para estos ovocitos, la ICSI se realizará 4-5 h después de la evaluación por microscopía de polarización, es decir, 7-8 h después de la OPU. Para ovocitos con MS claramente visible y PB/MS no muy próximos (ángulo entre PB y MS > 5◦), la ICSI se realizará normalmente 2-3 h después de la evaluación por microscopía de polarización, es decir, 5-6 h después de OPU, como para pacientes de 1 y 2 grupos. La ICSI se realizará de acuerdo con el protocolo estándar utilizando ICSI/micropipetas de sujeción (Microtech IVF, República Checa), polivinilpirrolidona (ICSI ™, Vitrolife, Suecia) y sistema de micromanipulación Eppendorf (Hamburgo, Alemania) equipado con termoplaca (Tokaohit, Japón). Los ovocitos se cultivarán individualmente y se preservará su orden, de modo que los otros resultados (datos del lapso de tiempo, resultados clínicos) puedan asociarse con ovocitos individuales. También controlaremos el tiempo desde la administración de gonadotropina coriónica humana (hCG) hasta la finalización de la fertilización real. Los ovocitos se desnudarán (HYASE-10X™, Vitrolife, Suecia) después de la OPU y se examinará la etapa de maduración. No se incluirán ovocitos en estadio de vesícula germinal (GV). Los ovocitos y embriones en una incubadora time-lapse del fabricante japonés Astec se cultivarán en una placa timelapse Origio, Dinamarca Sage 1-Step™, Origio, Dinamarca bajo aceite de parafina (OVOIL™, VITROLIFE, Suecia) a 37,0 °C, 6 % CO2 y 5%O2. La fertilización después de ICSI se definirá como la presencia de dos pronúcleos y 2 cuerpos polares 16-20 h después de ICSI. Los embriones se cultivarán durante 122-144 h.

Los hallazgos piloto se confirmarán en un ensayo de control aleatorio, es decir, se evaluará la eficiencia del uso de la visibilidad de la EM y la posición relativa al cuerpo polar como indicadores de la maduración de los ovocitos para optimizar el tiempo de ICSI.