난모세포 품질을 평가하기 위해 보조 생식 기술에서 감수분열 스핀들을 스캔 (SMART)

불임 치료의 주요 전략 중 하나는 체외수정(IVF)입니다. IVF 성공률은 여성의 연령, 난모세포의 질, 성숙 상태, 정자의 질 등 여러 주요 요인의 영향을 받습니다. 몇몇 저자들은 광학적으로 복굴절하는 감수분열 방추(MS)의 존재, 위치 및 지연이 난모세포 발달 능력과 관련되어 수정 및 배아 발달의 질에 영향을 미친다고 제안했습니다. 정상적인 방추 형태를 가진 난모세포는 눈에 보이지 않거나 비정상적인 감수분열 방추를 가진 난모세포에 비해 정배수체 배아를 생성할 가능성이 훨씬 더 높습니다. MS 형태에 기초하여 세포질 내 정자 주입(ICSI)의 시기를 조정하는 것도 제안되었습니다. 극체(PB)에 대한 MS의 위치를 ​​기반으로 ICSI 시간을 조정하면 35세 이상 여성의 수정 성공 확률이 높아지는 것으로 나타났습니다. 35세 이상 환자의 난모세포의 경우 배양 시간이 길수록 더 많은 수의 난모세포가 완전히 성숙(MII 단계)되어 ICSI에 준비될 수 있었습니다. 이러한 상황에서 MS 상태는 난모세포 미성숙을 나타내는 중요한 지표였습니다.

환자는 REDCap(Research Electronic Data Capture)을 사용하여 세 그룹으로 무작위 배정됩니다. 그룹 1, MS 이미징이 없는 표준 ICSI; 그룹 2, MS 영상화, 이어서 표준 ICSI, 그룹 3, MS 영상화 및 MS 상태에 따른 ICSI 수정. MS 평가를 받은 3군 환자의 난모세포는 MS 상태에 따라 난자 채취(OPU) 후 5~6시간 또는 OPU 후 7~8시간에 수정됩니다. MS 평가가 없는 난모세포는 모두 OPU 후 5~6시간 후에 수정됩니다. MS 평가는 파라핀 오일로 덮인 HEPES 완충액과 함께 약 5μl 매체가 들어 있는 미리 준비된 유리 바닥 접시에서 이루어지며 사용하기 1시간 전에 가열됩니다. Polar Body(PB)와 MS가 모두 잘 보이도록 바늘을 사용하여 난모세포를 회전시킨 후 광학현미경을 사용하여 사진을 촬영합니다. MS 상태와 MS와 PB 사이의 각도(α)는 난모세포 채취(OPU) 후 3~4시간 후에 확인됩니다. 동시에 편광 현미경 이미지가 획득됩니다(100배율의 편광 현미경). 특히 PB/MS가 근접한(PB와 MS 사이의 각도 < 5°) 또는 MS가 보이지 않는 그룹 3 환자의 난모세포의 경우 미성숙 난모세포로 예측됩니다. 이러한 난모세포의 경우 ICSI는 편광 현미경 평가 후 4-5시간, 즉 OPU 후 7-8시간 후에 수행됩니다. MS가 명확하게 보이고 PB/MS가 근접하지 않은 난모세포의 경우(PB와 MS 사이의 각도 > 5°) ICSI는 일반적으로 편광 현미경 평가 후 2~3시간, 즉 OPU 후 5~6시간 후에 수행됩니다. 1 및 2 그룹의 환자. ICSI는 ICSI/홀딩 마이크로피펫(Microtech IVF, 체코 공화국), 폴리비닐피롤리돈(ICSI™, Vitrolife, 스웨덴) 및 열판이 장착된 Eppendorf(독일 함부르크) 미세 조작 시스템(일본 토카오히트)을 사용하여 표준 프로토콜에 따라 수행됩니다. 난모세포는 개별적으로 배양되고 순서가 보존되므로 다른 결과(시간 경과 데이터, 임상 결과)가 개별 난모세포와 연관될 수 있습니다. 또한 인간 융모막 성선 자극 호르몬(hCG) 투여부터 실제 수정이 완료될 때까지의 시간을 모니터링할 것입니다. OPU 후 난모세포를 벗겨내고(HYASE-10X™, Vitrolife, 스웨덴) 성숙 단계를 검사합니다. Germinal Vesicle(GV) 단계의 난모세포는 포함되지 않습니다. 일본 제조업체인 Astec의 저속 배양기의 난모세포 및 배아는 저속 접시 Origio, 덴마크 Sage 1-Step™, Origio, 덴마크에서 파라핀 오일(OVOIL™, VITROLIFE, 스웨덴), 37.0°C, 6%에서 배양됩니다. CO2 및 5%O2. ICSI 후 수정은 ICSI 후 16~20시간에 2개의 전핵과 ​​2개의 극성체가 존재하는 것으로 정의됩니다. 배아는 122~144시간 동안 배양됩니다.

즉, ICSI 타이밍을 최적화하기 위해 MS 가시성과 극체에 대한 상대 위치를 난모세포 성숙의 지표로 사용하는 효율성을 평가할 것입니다.