Skanowanie wrzeciona mejotycznego w technikach wspomaganego rozrodu w celu oceny jakości oocytów (SMART)

Jedną z głównych strategii leczenia niepłodności jest zapłodnienie in vitro (IVF). Na skuteczność zapłodnienia in vitro wpływa kilka kluczowych czynników, w tym wiek kobiety, jakość i stan dojrzałości oocytów, a także jakość nasienia. Kilku autorów zasugerowało, że obecność, położenie i opóźnienie optycznie dwójłomnego wrzeciona mejotycznego (MS) są powiązane z kompetencjami rozwojowymi oocytów, wpływającymi na jakość zapłodnienia i rozwój zarodka. Oocyty o prawidłowej morfologii wrzeciona znacznie częściej wytwarzają zarodki euploidalne w porównaniu z oocytami z wrzecionami mejotycznymi, które nie są widoczne lub nieprawidłowe. Zaproponowano również dostosowanie czasu docytoplazmatycznego wstrzyknięcia plemnika (ICSI) w oparciu o morfologię stwardnienia rozsianego. Wykazano, że dostosowanie czasu ICSI do położenia MS względem ciała polarnego (PB) zwiększa prawdopodobieństwo pomyślnego zapłodnienia u kobiet po 35. roku życia. W przypadku oocytów pacjentów powyżej 35. roku życia dłuższy czas inkubacji umożliwił większej liczbie oocytów osiągnięcie pełnej dojrzałości (faza MII) i przygotowanie do ICSI. W tej sytuacji stan stwardnienia rozsianego był ważnym wskaźnikiem niedojrzałości oocytów.

Pacjent zostanie losowo przydzielony do trzech grup przy użyciu metody Research Electronic Data Capture (REDCap): grupa 1, standardowe ICSI bez obrazowania stwardnienia rozsianego; grupa 2, obrazowanie MS, a następnie standardowe ICSI, grupa 3, obrazowanie MS i zapłodnienie ICSI w zależności od stanu stwardnienia rozsianego. Oocyty od pacjentów z grupy 3 z oceną stwardnienia rozsianego zostaną zapłodnione w zależności od stanu stwardnienia rozsianego albo 5-6 godzin po pobraniu komórki jajowej (OPU), albo 7-8 godzin po OPU. Wszystkie oocyty bez oceny MS zostaną zapłodnione 5-6 godzin po OPU. Ocena MS będzie odbywać się w przygotowanych wcześniej naczyniach ze szklanym dnem, zawierających około 5 μl pożywki z buforem HEPES pokrytym olejem parafinowym, podgrzewanych na godzinę przed użyciem. Oocyt zostanie obrócony za pomocą igły, tak aby ciałko polarne (PB) i MS były dobrze widoczne, a zdjęcia zostaną wykonane przy użyciu mikroskopu optycznego. Stan MS i kąt (α) pomiędzy MS i PB zostaną uzyskane 3-4 godziny po pobraniu oocytów (OPU). W tym samym czasie uzyskany zostanie obraz z mikroskopu w świetle spolaryzowanym (mikroskopia w świetle spolaryzowanym przy powiększeniu × 100). Szczególnie w przypadku oocytów z grupy 3 pacjentów z PB/MS w bliskiej odległości (kąt między PB a MS < 5◦) lub stwardnieniem rozsianym niewidocznym będzie przewidywane jako niedojrzałe oocyty. W przypadku tych oocytów ICSI zostanie wykonane 4–5 godzin po ocenie pod mikroskopem polaryzacyjnym, tj. 7–8 godzin po OPU. W przypadku oocytów z wyraźnie widocznym MS i PB/MS nie w bliskiej odległości (kąt między PB a MS > 5◦) ICSI zostanie wykonane zazwyczaj 2-3 godziny po ocenie pod mikroskopem polaryzacyjnym, tj. 5-6 godzin po OPU, jak w przypadku pacjenci z grup 1 i 2. ICSI zostanie przeprowadzone zgodnie ze standardowym protokołem przy użyciu ICSI/mikropipet trzymających (Microtech IVF, Czechy), poliwinylopirolidonu (ICSI™, Vitrolife, Szwecja) i systemu mikromanipulacji Eppendorf (Hamburg, Niemcy) wyposażonego w płytkę termiczną (Tokaohit, Japonia). Oocyty będą hodowane indywidualnie, z zachowaniem kolejności, tak aby pozostałe wyniki (dane z timelapse, wyniki kliniczne) można było powiązać z poszczególnymi oocytami. Będziemy także monitorować czas od podania ludzkiej gonadotropiny kosmówkowej (hCG) do zakończenia właściwego zapłodnienia. Oocyty zostaną obnażone (HYASE-10X™, Vitrolife, Szwecja) po OPU i zbadany zostanie etap dojrzewania. Oocyt w stadium pęcherzyka zarodkowego (GV) nie będzie uwzględniony. Oocyty i zarodki w inkubatorze poklatkowym japońskiego producenta Astec będą hodowane w naczyniu timelapse Origio, Dania Sage 1-Step™, Origio, Dania w oleju parafinowym (OVOIL™, VITROLIFE, Szwecja) w temperaturze 37,0°C, 6% CO2 i 5%O2. Zapłodnienie po ICSI będzie zdefiniowane jako obecność dwóch przedjąder i 2 ciałek polarnych 16-20 godzin po ICSI. Zarodki będą hodowane przez 122-144 godziny.

Wyniki pilotażu zostaną potwierdzone w randomizowanym badaniu kontrolnym, tj. oceniona zostanie skuteczność wykorzystania widoczności MS i względnego położenia względem ciałka kierunkowego jako wskaźników dojrzewania oocytów w celu optymalizacji czasu ICSI.