Het scannen van de meiotische spil in geassisteerde voortplantingstechnieken om de eicelkwaliteit te beoordelen (SMART)

Een van de belangrijkste strategieën voor de behandeling van onvruchtbaarheid is in-vitrofertilisatie (IVF). Het succespercentage van IVF wordt beïnvloed door verschillende sleutelfactoren, waaronder de leeftijd van de vrouw, de kwaliteit van de eicellen en de rijpingstoestand, evenals de kwaliteit van het sperma. Verschillende auteurs hebben gesuggereerd dat de aanwezigheid, positie en vertraging van de optisch dubbelbrekende meiotische spil (MS) verband houden met de ontwikkelingscompetentie van eicellen, waardoor de kwaliteit van de bevruchting en de ontwikkeling van embryo's wordt beïnvloed. Oöcyten met een normale spoelmorfologie hebben een significant grotere kans om euploïde embryo's te produceren vergeleken met eicellen met meiotische spoeltjes die niet zichtbaar of abnormaal zijn. Er is ook voorgesteld om de timing van intracytoplasmatische sperma-injectie (ICSI) aan te passen op basis van de MS-morfologie. Er werd aangetoond dat het aanpassen van het tijdstip van ICSI op basis van de positie van de MS ten opzichte van het poollichaam (PB) de kans op succesvolle bevruchting vergroot bij vrouwen ouder dan 35 jaar. Bij de eicellen van patiënten ouder dan 35 jaar zorgde de langere incubatietijd ervoor dat een groter aantal eicellen volledig volgroeid kon worden (MII-fase) en voorbereid kon worden op ICSI. In deze situatie was de MS-status een belangrijke indicator voor de onrijpheid van de eicellen.

De patiënt wordt gerandomiseerd in drie groepen met behulp van Research Electronic Data Capture (REDCap): groep 1, standaard ICSI zonder MS-beeldvorming; groep 2, MS-beeldvorming gevolgd door standaard ICSI, groep 3, MS-beeldvorming en ICSI-bevruchting volgens MS-status. Oöcyten van groep 3-patiënten met MS-evaluatie zullen worden bevrucht op basis van de MS-status, hetzij 5-6 uur na het ophalen van de eicel (OPU), hetzij 7-8 uur na OPU. Oöcyten zonder MS-evaluatie zullen allemaal 5-6 uur na OPU worden bevrucht. MS-evaluatie zal plaatsvinden in vooraf bereide schalen met glazen bodem met ongeveer 5 μl medium met de HEPES-buffer bedekt met paraffineolie, één uur voor gebruik op temperatuur gebracht. De eicel wordt met een naald geroteerd zodat Polar Body (PB) en MS beide goed zichtbaar zijn, en er worden foto's gemaakt met een optische microscoop. De MS-status en de hoek (α) tussen MS en PB worden 3-4 uur na het ophalen van de eicellen (OPU) verkregen. Tegelijkertijd wordt het microscopiebeeld met gepolariseerd licht verkregen (gepolariseerd lichtmicroscopie bij een vergroting van x100). Speciaal voor eicellen van groep 3-patiënten met PB/MS in de directe nabijheid (hoek tussen PB en MS < 5◦) of MS die niet zichtbaar is, zal dit worden voorspeld als onrijpe eicellen. Voor deze eicellen zal ICSI 4-5 uur na de evaluatie van de polarisatiemicroscopie worden uitgevoerd, d.w.z. 7-8 uur na OPU. Voor eicellen met MS duidelijk zichtbaar en PB/MS niet in de buurt (hoek tussen PB en MS > 5◦) zal ICSI doorgaans 2-3 uur na de polarisatiemicroscopie-evaluatie worden uitgevoerd, d.w.z. 5-6 uur na OPU, zoals voor patiënten uit 1 en 2 groepen. ICSI zal worden uitgevoerd volgens het standaardprotocol met behulp van ICSI/holding-micropipetten (Microtech IVF, Tsjechië), polyvinylpyrrolidon (ICSI™, Vitrolife, Zweden) en Eppendorf (Hamburg, Duitsland) micromanipulatiesysteem uitgerust met thermoplate (Tokaohit, Japan). De eicellen worden individueel opgekweekt en hun volgorde wordt behouden, zodat de overige uitkomsten (data uit timelapse, klinische resultaten) kunnen worden geassocieerd met individuele eicellen. We zullen ook de tijd monitoren vanaf de toediening van humaan choriongonadotrofine (hCG) tot de voltooiing van de daadwerkelijke bevruchting. De eicellen zullen na OPU worden blootgelegd (HYASE-10X™, Vitrolife, Zweden) en het rijpingsstadium zal worden onderzocht. Eicellen in het kiemblaasje (GV)-stadium worden niet opgenomen. Oöcyten en embryo's in time-lapse-incubator van de Japanse fabrikant Astec zullen worden gekweekt in een timelapse-schaal Origio, Denemarken Sage 1-Step™, Origio, Denemarken onder paraffineolie (OVOIL™, VITROLIFE, Zweden) bij 37,0 °C, 6% CO2 en 5%O2. Bevruchting na ICSI zal worden gedefinieerd als de aanwezigheid van twee pronuclei en twee polaire lichamen 16-20 uur na ICSI. Embryo's worden gedurende 122-144 uur gekweekt.

Pilotbevindingen zullen worden bevestigd in een gerandomiseerde controlestudie, d.w.z. dat de efficiëntie van het gebruik van MS-zichtbaarheid en relatieve positie ten opzichte van het poollichaam als indicatoren voor eicelrijping om de ICSI-timing te optimaliseren zal worden geëvalueerd.