片頭痛患者の生化学的プロファイリング (SPHERA_WP1_1)

これまでの証拠は、片頭痛患者ではエンドカンナビディオーム システム (eCBome) が変化していることを示し、次のことを示しています。i) 健常対照と比較して、突発性および慢性片頭痛患者では異化酵素 (MAGL および FAAH) の遺伝子発現が変化している。 ii) 内因性カンナビノイド様脂質パルミトイルエタノールアミド (PEA) の末梢レベルの変化。急性片頭痛相中の PEA レベルの増加の証拠。

カルシトニン遺伝子関連ペプチド (mAb) に対する mAb モノクローナル抗体は有効性と忍容性が高いにもかかわらず、RCT および実際の研究からの証拠は、mAb が患者の 40% で失敗することを示しています。 これらの患者は、CGRP 非依存性の表現型を持っている可能性があり、eCBome 機能不全に関連している可能性があります。

主な目的は、片頭痛患者のコホート全体の詳細な表現型解析を実行し、mAbs 治療に対する応答者となる患者のサブグループ（すなわち、毎月の片頭痛日数 >/= 50% の減少を達成した患者）を非応答者と比較して比較することです。 - レスポダー群（すなわち、毎月の片頭痛日数の減少が 50% 未満に達した患者）。

神経ペプチド、マイクロRNA、炎症性サイトカイン、キヌレニン代謝物を評価します。 これらの発見により、特定の標的を絞った予防治療に抵抗する片頭痛患者のマルチバイオマーカーパネルの特徴を同定できるようになり、他の分子標的が明らかになる可能性がある。

研究デザイン:

この研究は、イタリア保健省（GR-2021-12372429）からの資金提供によるSPHERAプロジェクトの一部です。 患者は、IRCCS モンディーノ研究所 (パヴィア) の外来診療所およびラクイラ大学神経科 (アヴェッツァーノ) に通う患者から登録されます。

mAbs の開始前 (ベースライン T0) と mAbs 治療の 3 か月後 (T1) にデータを収集します。 応答グループと非応答グループを特定し、T0 と T1 で 2 つのサブグループの生化学プロファイリングを実行します。

方法:

すべての患者は、以下の分析を含む生化学的プロファイリングを受けます。

• eCBome システム: 末梢血単核球における FAAH、MAGL、DAGL、NAPE、NAAA の mRNS レベル、
• AEA、2-AG、PEA、およびOEAの血漿レベル。 CGRP、PACAP、VIP。 IL-1ベータ、TNF-アルファ、IL-4、およびIL-10;キヌレン酸およびキノリン酸;
• 末梢血単核球における miR-382-5p、miR-34a、miR-30a、および miR-155、
• 患者の糞便中の微生物叢のショットガン分析。

概日リズムの影響を避けるために、午前9時から11時の間に生化学的サンプリングを収集します。 すべての評価は片頭痛発作間欠期に実行されます。

以下の収集方法が採用されます。

• PBMC における mRNA および microRNA の分析。 血液サンプルはエチレンジアミン四酢酸チューブ内に収集され、最初に PBMC と全 RNA を分離します。 ユビキチン C と U6 は、eCBome 酵素と miRNA をコードする遺伝子のハウスキーピング遺伝子として機能します。
• キヌレン酸およびキノリン酸、AEA、PEA、2-AG、および OEA は、Gao が公開した方法 (Gao、2020) に従って決定されます。 キヌレニン代謝産物レベルは、Fuertig によって記載された方法 (Fuertig、2016) に従って測定されます。
• CGRP α、PACAP-38、VIP レベルは、市販の酵素結合免疫吸着アッセイを使用して測定されます。
• IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10 サイトカインは、Simple Plex アッセイ パネルを備えた Ella Automated Immunoassay System によって測定されます。
• マイクロバイオーム分析: 便検体は正しく収集および保存された後、DNA 抽出のためにトランスレーショナル神経血管研究ユニット (IRCCS モンディーノ財団) に送られます。

統計分析 サンプルサイズの計算は主要結果 (MAGL 式) に対して定義され、検出力分析は共主要結果 (FAAH 式) に対して実行されます。

Greco 2021 の研究による予備データによると、非応答者と応答者の比率: 2:3、MAGL 遺伝子発現: 非応答者で 8±10 RQ、応答者で 3±4 RQ が示唆されており、最小サンプル サイズは信頼区間 95% と検出力 80% を得るために、88 人の片頭痛患者 (応答者 53 人、非応答者 35 人) を対象にしました。

正規性分析は、パラメトリック手法またはノンパラメトリック手法を評価するために実行されます。

単変量解析を実行して、T0 における非応答群と応答群の間の人口統計学的、臨床的および生化学的パラメーターの違いを検索します。主な統計分析には、交絡因子を制御するための多変量アプローチが含まれます。 必要に応じて多重比較の補正を考慮して、有意水準は alpha = 0.05 に設定されます。