Migreenipotilaiden biokemiallinen profilointi (SPHERA_WP1_1)

Aiemmat todisteet osoittivat, että endokannabidiomijärjestelmä (eCBome) on muuttunut migreenipotilailla, mikä osoittaa: i) kataboloivien entsyymien (MAGL ja FAAH) muuttuneen geeniekspression potilailla, joilla on episodinen ja krooninen migreeni verrattuna terveisiin kontrolleihin; ii) endokannabinoidin kaltaisen lipidipalmitoyylietanolamidin (PEA) muuttuneet perifeeriset tasot ja todisteita lisääntyneistä PEA-tasoista akuutin migreenivaiheen aikana.

Huolimatta kalsitoniinigeeniin liittyvää peptidiä (mAb) vastaan ​​suunnattujen monoklonaalisten vasta-aineiden korkeasta tehokkuudesta ja siedettävyydestä, RCT:istä ja tosielämän tutkimuksista saadut todisteet osoittavat, että mAb:t epäonnistuvat 40 %:lla potilaista. Näillä potilailla saattaa olla CGRP-riippumaton fenotyyppi, joka saattaa olla yhteydessä eCBomen toimintahäiriöön.

Ensisijaisena tavoitteena on tehdä syvä fenotyypitys koko migreenipotilaiden kohortista vertaamalla niiden potilaiden alaryhmiä, jotka reagoivat mAb-hoitoon (eli ne potilaat, joiden kuukausittaisten migreenipäivien määrä väheni >/= 50 %) verrattuna ei-potilaisiin. -Respoder-ryhmä (eli potilaat, joilla kuukausittaisten migreenipäivien määrä väheni < 50 %).

Arvioimme neuropeptidejä, mikroRNA:ita, tulehduksellisia sytokiinejä ja kinureniinimetaboliitteja. Nämä havainnot mahdollistavat monibiomarkkeripaneelin tunnistamisen migreenipotilaista, jotka vastustavat kohdennettuja ennaltaehkäiseviä hoitoja ja mahdollisesti paljastavat muita molekyylikohteita.

SUUNNITTELU:

Tämä tutkimus on osa SPHERA-projektia, jota rahoittaa Italian terveysministeriö (GR-2021-12372429). Potilaita otetaan IRCCS Mondino Instituten (Pavia) poliklinikalla ja L'Aquilan yliopiston (Avezzano) neurologian osastolla olevista potilaista.

Keräämme tietoja ennen mAb-hoidon aloittamista (perusviiva-T0) ja kolmen kuukauden (T1) mAb-hoidon jälkeen. Tunnistamme vastaajaryhmät ja vastaamattomat ryhmät ja teemme sitten biokemiallisen profiloinnin kahdelle alaryhmälle T0:ssa ja T1:ssä.

MENETELMÄT:

Kaikille potilaille tehdään biokemiallinen profilointi, joka sisältää analyysin:

• eCBome-järjestelmä: FAAH-, MAGL-, DAGL-, NAPE-, NAAA-mRNS-tasot perifeerisen veren mononukleaarisoluissa,
• plasman AEA-, 2-AG-, PEA- ja OEA-tasot; CGRP, PACAP ja VIP; IL-1 beeta, TNF-alfa, IL-4 ja IL-10; kinureeni- ja kinoliinihapot;
• miR-382-5p, miR-34a, miR-30a ja miR-155 perifeerisen veren mononukleaarisoluissa,
• Potilaiden ulosteiden mikrobiotan haulikkoanalyysi.

Keräämme biokemiallisia näytteitä klo 9-11 välisenä aikana vuorokausirytmin vaikutuksen välttämiseksi. Kaikki arvioinnit suoritetaan migreenin interiktaalisessa vaiheessa.

Seuraavat keräysmenetelmät otetaan käyttöön:

• mRNA- ja mikroRNA-analyysi PBMC:issä. Verinäytteet kerätään etyleenidiamiinitetraetikkahappoputkista, eristetään ensin PBMC:t ja kokonais-RNA. Ubikitiini C ja U6 toimivat taloudenhoitogeeneinä eCBome-entsyymejä ja miRNA:ita koodaaville geeneille.
• Kynureenihappo ja kinoliinihappo, AEA, PEA, 2-AG ja OEA määritetään Gaon julkaiseman menetelmän mukaan (Gao, 2020). Kinureniinin metaboliittitasot mitataan Fuertigin (Fuertig, 2016) kuvaaman menetelmän mukaisesti.
• CGRP alfa-, PACAP-38- ja VIP-tasot mitataan käyttämällä kaupallista entsyymikytkentäistä immunosorbenttimääritystä
• IL-1beta, TNF-alfa, IL-4, IL-10 sytokiini mitataan Ella Automated Immunoassay System -järjestelmällä Simple Plex -määrityspaneelilla.
• Mikrobiomianalyysi: ulostenäytteiden oikean keräyksen ja säilytyksen jälkeen ne toimitetaan translaatiohermosolujen tutkimusyksikköön (IRCCS Mondino Foundation) DNA:n erottamista varten.

TILASTOINEN ANALYYSI Otoskoon laskenta määritetään ensisijaiselle tulokselle (MAGL-lauseke), kun taas tehoanalyysi suoritetaan ensisijaiselle tulokselle (FAAH-lauseke).

Greco 2021 -työstä saatujen alustavien tietojen mukaan, jotka viittaavat vastaamattomien ja vastaajien väliseen suhteeseen: 2:3 ja MAGL-geenin ilmentyminen: 8±10 RQ ei-vastaavilla ja 3±4 RQ vastaajilla, otoksen vähimmäiskoko on 88 migreenipotilasta (53 vastetta ja 35 EI-vastaavaa), jotta luottamusväli olisi 95 % ja teho 80 %.

Normaaliusanalyysi suoritetaan parametristen tai ei-parametristen menetelmien arvioimiseksi.

Suoritamme yksimuuttuja-analyysin etsiäksemme eroja demografisissa, kliinisissä ja biokemiallisissa parametreissa ei-responder- ja Responder-ryhmien välillä T0:ssa. Päätilastollinen analyysi sisältää monimuuttujan lähestymistavan sekatekijöiden hallintaan. Merkitystaso asetetaan arvoon alfa = 0,05 ottaen huomioon useiden vertailujen korjaus tarvittaessa.