편두통 환자의 생화학적 프로파일링 (SPHERA_WP1_1)

이전 증거에 따르면 편두통 환자에서 체내칸나비옴 시스템(eCBome)이 변경되어 i) 건강한 대조군과 비교하여 간헐적 및 만성 편두통 환자에서 이화 효소(MAGL 및 FAAH)의 유전자 발현이 변경되었습니다. ii) 급성 편두통 단계 동안 PEA 수준이 증가했다는 증거로 체내칸나비노이드 유사 지질 팔미토일에탄올아미드(PEA)의 말초 수준이 변경되었습니다.

칼시토닌 유전자 관련 펩타이드(mAbs)에 대한 mAbs 단일클론 항체의 높은 효과성과 내약성에도 불구하고, RCT 및 실제 연구의 증거에 따르면 mAb가 환자의 40%에서 실패하는 것으로 나타났습니다. 이들 환자는 eCBome 기능 장애와 잠재적으로 연관되어 있는 비 CGRP 의존성 표현형을 가질 수 있습니다.

1차 목표는 mAbs 치료에 대한 반응자가 될 환자(즉, 월 편두통 일수 >/= 50% 감소를 달성한 환자)의 하위군을 비군과 비교하여 전체 편두통 환자 집단의 심층 표현형 분석을 수행하는 것입니다. -레스포더 그룹(즉, 월간 편두통 일수 < 50% 감소를 달성한 환자).

우리는 신경펩티드, 마이크로RNA, 염증성 사이토카인, 키누레닌 대사산물을 평가할 것입니다. 이러한 발견을 통해 특정 표적 예방 치료에 저항하는 편두통 환자의 다중 바이오마커 패널 시그니처를 식별하고 잠재적으로 다른 분자 표적을 공개할 수 있게 될 것입니다.

연구 설계:

이 연구는 이탈리아 보건부(GR-2021-12372429)의 자금 지원을 받는 SPHERA 프로젝트의 일부입니다. 환자는 IRCCS Mondino Institute(Pavia)의 외래 진료소와 L'Aquila 대학(Avezzano)의 신경과에 참석하는 환자로부터 등록됩니다.

우리는 mAbs 시작 전(기준선-T0)과 mAbs 치료 3개월 후(T1)에 데이터를 수집할 것입니다. 응답자 그룹과 비응답자 그룹을 식별한 다음 T0 및 T1에서 두 하위 그룹의 생화학적 프로파일링을 수행합니다.

행동 양식:

모든 환자는 다음 분석을 포함하는 생화학적 프로파일링을 받게 됩니다.

• eCBome 시스템: 말초 혈액 단핵 세포의 FAAH, MAGL, DAGL, NAPE, NAAA의 mRNS 수준,
• AEA, 2-AG, PEA 및 OEA의 혈장 수준; CGRP, PACAP 및 VIP; IL-1베타, TNF-알파, IL-4 및 IL-10; 키누렌산 및 퀴놀린산;
• 말초 혈액 단핵 세포의 miR-382-5p, miR-34a, miR-30a 및 miR-155,
• 환자 대변의 미생물에 대한 샷건 분석.

생체리듬 영향을 피하기 위해 오전 9시에서 11시 사이에 생화학적 샘플링을 수집할 것입니다. 모든 평가는 편두통 간극 단계에서 수행됩니다.

다음과 같은 수집 방법이 채택됩니다.

• PBMC의 mRNA 및 microRNA 분석. 혈액 샘플은 에틸렌디아민 테트라아세트산 튜브 내에서 수집되며, 먼저 PBMC와 총 RNA를 분리합니다. 유비퀴틴 C와 U6는 eCBome 효소와 miRNA를 코딩하는 유전자의 하우스키핑 유전자 역할을 합니다.
• 키누렌산 및 퀴놀린산, AEA, PEA, 2-AG 및 OEA는 Gao 공개 방법(Gao, 2020)에 따라 결정됩니다. 키누레닌 대사산물 수준은 Fuertig(Fuertig, 2016)에 의해 설명된 방법에 따라 측정됩니다.
• CGRP 알파, PACAP-38 및 VIP 수준은 상업용 효소 연결 면역흡착 분석을 사용하여 측정됩니다.
• IL-1베타, TNF-알파, IL-4, IL-10 사이토카인은 Simple Plex 분석 패널을 갖춘 Ella 자동 면역분석 시스템으로 측정됩니다.
• 미생물 분석: 대변 표본을 올바르게 수집하고 보존한 후 DNA 추출을 위해 중개 신경혈관 연구실(IRCCS Mondino Foundation)로 전달됩니다.

통계 분석 표본 크기 계산은 1차 결과(MAGL 표현)에 대해 정의되는 반면, 검정력 분석은 공동 1차 결과(FAAH 표현)에 대해 수행됩니다.

비응답자와 응답자 간의 비율: 2:3 및 MAGL 유전자 발현: 비응답자의 경우 8±10 RQ, 응답자의 경우 3±4 RQ를 제안하는 Greco 2021 작업의 예비 데이터에 따르면 최소 샘플 크기는 다음과 같습니다. 88명의 편두통 환자(53명의 응답자 및 35명의 비-응답자)는 신뢰 구간 95% 및 80%의 검정력을 갖습니다.

모수적 또는 비모수적 방법을 평가하기 위해 정규성 분석이 수행됩니다.

T0에서 비응답자 그룹과 응답자 그룹 간의 인구통계학적, 임상적, 생화학적 매개변수의 차이를 검색하기 위해 단변량 분석을 수행할 것입니다. 주요 통계 분석에는 혼란 요인을 제어하기 위한 다변량 접근 방식이 포함됩니다. 적절한 경우 다중 비교에 대한 수정을 고려하여 유의성 수준을 알파 = 0.05로 설정합니다.