Biokemisk profilering af migrænepatienter (SPHERA_WP1_1)

Tidligere beviser viste, at endocannabidiomsystemet (eCBome) er ændret hos migrænepatienter, hvilket viser: i) ændret genekspression af kataboliserende enzymer (MAGL og FAAH) hos patienter med episodisk og kronisk migræne sammenlignet med raske kontroller; ii) ændrede perifere niveauer af det endocannabinoid-lignende lipid palmitoylethanolamid (PEA) med tegn på øgede PEA-niveauer under den akutte migrænefase.

På trods af den høje effektivitet og tolerabilitet af monoklonale antistoffer mod monoklonale antistoffer mod calcitoningen-relateret peptid (mAbs), viser beviser fra RCT'er og virkelige studier, at mAbs fejler hos 40 % af patienterne. Disse patienter kan bære en ikke-CGRP-afhængig fænotype, potentielt forbundet med eCBome-dysfunktion.

Det primære mål er at udføre en dyb fænotypning af hele kohorten af ​​migrænepatienter ved at sammenligne undergrupperne af de patienter, der vil være Responders på mAbs-behandling (nemlig de patienter, der opnåede en reduktion af månedlige migrænedage >/= 50%) sammenlignet med de ikke -Respodergruppe (nemlig de patienter, der opnåede en reduktion af månedlige migrænedage < 50%).

Vi vil evaluere neuropeptider, mikroRNA'er, inflammatoriske cytokiner og kynurenin-metabolitter. Disse resultater vil muliggøre identifikation af en multibiomarkør panel signatur af migrænepatienter, der modstår specifikt målrettede forebyggende behandlinger og potentielt afsløre andre molekylære mål.

STUDIEDESIGN:

Denne undersøgelse er en del af SPHERA-projektet med støtte fra det italienske sundhedsministerium (GR-2021-12372429). Patienter vil blive indskrevet fra dem, der går på ambulatoriet på IRCCS Mondino Institute (Pavia) og Neurology Department ved University of L'Aquila (Avezzano).

Vi vil indsamle data før mAbs starter (baseline-T0) og efter tre måneders (T1) mAbs behandling. Vi vil identificere Repsonder og Non-responder grupper, og vi udfører derefter biokemisk profilering af de to undergrupper ved T0 og T1.

METODER:

Alle patienter vil gennemgå en biokemisk profilering, der vil omfatte analyse af:

• eCBome-system: mRNS-niveauer af FAAH, MAGL, DAGL, NAPE, NAAA i perifere mononukleære blodceller,
• plasmaniveauer af AEA, 2-AG, PEA og OEA; CGRP, PACAP og VIP; IL-1beta, TNF-alfa, IL-4 og IL-10; kynurensyre og quinolinsyre;
• miR-382-5p, miR-34a, miR-30a og miR-155 i mononukleære celler fra perifert blod,
• haglgeværanalyse af mikrobiota i patienters afføring.

Vi vil indsamle biokemiske prøver mellem kl. 9 og 11 for at undgå påvirkning af døgnrytmen. Al evaluering vil blive udført i migræne interiktal fase.

Følgende indsamlingsmetoder vil blive vedtaget:

• mRNA- og mikroRNA-analyse i PBMC'er. Blodprøver vil blive indsamlet i ethylendiamintetra-eddikesyrerør, vi vil først isolere PBMC'er og totalt RNA. Ubiquitin C og U6 vil fungere som husholdningsgener for gener, der koder for eCBome-enzymer og miRNA'er.
• kynurensyre og quinolinsyre, AEA, PEA, 2-AG og OEA vil blive bestemt efter Gao offentliggjort metode (Gao, 2020). Kinurenin-metabolitniveauer vil blive målt efter metoden beskrevet af Fuertig (Fuertig, 2016).
• CGRP alfa-, PACAP-38- og VIP-niveauer vil blive målt ved hjælp af en kommerciel enzymkoblet immunosorbentanalyse
• IL-1beta, TNF-alpha, IL-4, IL-10 cytokin vil blive målt af Ella Automated Immunoassay System med et Simple Plex assay panel.
• Mikrobiomanalyse: efter korrekt indsamling og konservering af afføringsprøver vil de blive leveret til Translational Neurovascular Research Unit (IRCCS Mondino Foundation) til DNA-ekstraktion.

STATISTISK ANALYSE Prøvestørrelsesberegning er defineret for primært udfald (MAGL-udtryk), mens en effektanalyse udføres for det co-primære udfald (FAAH-udtryk).

Ifølge foreløbige data fra arbejdet i Greco 2021, der tyder på et forhold mellem ikke-respondere og Responders: 2:3 og MAGL-genekspression: 8±10 RQ hos ikke-responders og 3±4 RQ hos Responders, er den mindste prøvestørrelse på 88 migrænepatienter (53 Responders og 35 NON-Respondere) for at have et konfidensinterval på 95 % og en styrke på 80 %.

Normalitetsanalyse vil blive udført for at evaluere parametriske eller ikke-parametriske metoder.

Vi vil udføre en univariat analyse for at søge efter forskelle i demografiske, kliniske og biokemiske parametre mellem Non-Responder- og Responder-grupper ved T0. Den vigtigste statistiske analyse vil omfatte en multivariat tilgang til kontrol for konfoundere. Signifikansniveauet vil blive sat til alfa = 0,05 under hensyntagen til korrektion for flere sammenligninger, hvor det er relevant.