Biochemische profilering van migrainepatiënten (SPHERA_WP1_1)

Eerder bewijsmateriaal toonde aan dat het endocannabidiomesysteem (eCBome) veranderd is bij migrainepatiënten, wat het volgende aantoont: i) veranderde genexpressie van kataboliserende enzymen (MAGL en FAAH) bij patiënten met episodische en chronische migraine vergeleken met gezonde controles; ii) veranderde perifere niveaus van het endocannabinoïde-achtige lipide palmitoylethanolamide (PEA) met bewijs van verhoogde PEA-niveaus tijdens de acute migrainefase.

Ondanks de hoge effectiviteit en verdraagbaarheid van monoklonale mAbs-antilichamen gericht tegen het Calcitonine-gengerelateerde peptide (mAbs), toont bewijs uit RCT's en praktijkstudies aan dat mAbs bij 40% van de patiënten falen. Deze patiënten kunnen een niet-CGRP-afhankelijk fenotype hebben, mogelijk gekoppeld aan eCBome-disfunctie.

Het primaire doel is om een ​​diepgaande fenotypering uit te voeren van het hele cohort van migrainepatiënten, waarbij de subgroepen worden vergeleken van de patiënten die zullen reageren op mAbs-behandeling (namelijk die patiënten die een vermindering van het aantal maandelijkse migrainedagen >/= 50%) hebben bereikt in vergelijking met de niet-patiënten. -Respodergroep (namelijk die patiënten die een vermindering van het aantal maandelijkse migrainedagen < 50%) bereikten.

We zullen neuropeptiden, microRNA's, inflammatoire cytokines en kynurenine-metabolieten evalueren. Deze bevindingen zullen de identificatie mogelijk maken van een multibiomarkerspanelsignatuur van migrainepatiënten die zich verzetten tegen specifiek gerichte preventieve behandelingen en mogelijk andere moleculaire doelwitten onthullen.

STUDIEONTWERP:

Deze studie maakt deel uit van het SPHERA-project met financiering van het Italiaanse ministerie van Volksgezondheid (GR-2021-12372429). Patiënten zullen worden ingeschreven uit degenen die de polikliniek van het IRCCS Mondino Instituut (Pavia) en de afdeling Neurologie van de Universiteit van L'Aquila (Avezzano) bezoeken.

We zullen gegevens verzamelen vóór aanvang van de mAbs (basislijn-T0) en na drie maanden (T1) behandeling met mAbs. We zullen Repsonder- en Non-respondergroepen identificeren en vervolgens biochemische profilering uitvoeren van de twee subgroepen op T0 en T1.

METHODEN:

Alle patiënten zullen een biochemische profilering ondergaan, inclusief analyse van:

• eCBome-systeem: mRNS-niveaus van FAAH, MAGL, DAGL, NAPE, NAAA in mononucleaire cellen in perifeer bloed,
• plasmaspiegels van AEA, 2-AG, PEA en OEA; CGRP, PACAP en VIP; IL-lbèta, TNF-alfa, IL-4 en IL-10; kynurenine- en chinolinezuren;
• miR-382-5p, miR-34a, miR-30a en miR-155 in mononucleaire cellen uit perifeer bloed,
• Shotgun-analyse van microbiota in de ontlasting van patiënten.

We zullen tussen 9.00 en 11.00 uur biochemische monsters verzamelen om invloed op het circadiane ritme te voorkomen. Alle evaluaties zullen worden uitgevoerd in de interictale migrainefase.

De volgende inzamelmethoden zullen worden toegepast:

• mRNA- en microRNA-analyse in PBMC's. Bloedmonsters zullen worden verzameld in ethyleendiaminetetra-azijnzuurbuizen, we zullen eerst PBMC's en totaal RNA isoleren. Ubiquitine C en U6 zullen fungeren als huishoudgenen voor genen die coderen voor de eCBome-enzymen en miRNA's.
• kynureninezuur en chinolinezuur, AEA, PEA, 2-AG en OEA zullen worden bepaald volgens de door Gao gepubliceerde methode (Gao, 2020). De kinureninemetabolietenniveaus zullen worden gemeten volgens de methode beschreven door Fuertig (Fuertig, 2016).
• CGRP-alfa-, PACAP-38- en VIP-niveaus zullen worden gemeten met behulp van een commerciële enzymgekoppelde immunosorbenttest
• IL-1beta, TNF-alfa, IL-4, IL-10 cytokine zullen worden gemeten door het Ella Automated Immunoassay System met een Simple Plex assaypanel.
• Microbioomanalyse: na correcte verzameling en conservering van ontlastingsmonsters worden deze afgeleverd bij de Translational Neurovascular Research Unit (IRCCS Mondino Foundation) voor DNA-extractie.

STATISTISCHE ANALYSE De berekening van de steekproefgrootte wordt gedefinieerd voor de primaire uitkomst (MAGL-expressie), terwijl een poweranalyse wordt uitgevoerd voor de co-primaire uitkomst (FAAH-expressie).

Volgens voorlopige gegevens uit het werk van Greco 2021 die een verhouding suggereren tussen non-responders en responders: 2:3 en MAGL-genexpressie: 8±10 RQ bij non-responders en 3±4 RQ bij responders, is de minimale steekproefomvang 88 migrainepatiënten (53 responders en 35 niet-responders) om een ​​betrouwbaarheidsinterval van 95% en een power van 80% te hebben.

Normaliteitsanalyse zal worden uitgevoerd om parametrische of niet-parametrische methoden te evalueren.

We zullen een univariate analyse uitvoeren om te zoeken naar verschillen in demografische, klinische en biochemische parameters tussen non-responder- en respondergroepen op T0. De belangrijkste statistische analyse zal een multivariate benadering van controle op confounders omvatten. Het significantieniveau wordt vastgesteld op alfa = 0,05, waarbij indien nodig rekening wordt gehouden met correctie voor meerdere vergelijkingen.