Biochemisches Profiling von Migränepatienten (SPHERA_WP1_1)

Frühere Erkenntnisse zeigten, dass das Endocannabidiom-System (eCBome) bei Migränepatienten verändert ist. Dies zeigte: i) eine veränderte Genexpression katabolisierender Enzyme (MAGL und FAAH) bei Patienten mit episodischer und chronischer Migräne im Vergleich zu gesunden Kontrollpersonen; ii) veränderte periphere Spiegel des Endocannabinoid-ähnlichen Lipids Palmitoylethanolamid (PEA) mit Hinweis auf erhöhte PEA-Spiegel während der akuten Migränephase.

Trotz der hohen Wirksamkeit und Verträglichkeit monoklonaler mAb-Antikörper, die gegen das Calcitonin-Gen-verwandte Peptid (mAbs) gerichtet sind, zeigen Ergebnisse aus RCTs und realen Studien, dass mAbs bei 40 % der Patienten versagen. Diese Patienten können einen nicht CGRP-abhängigen Phänotyp aufweisen, der möglicherweise mit einer eCBome-Dysfunktion zusammenhängt.

Das Hauptziel besteht darin, eine tiefgreifende Phänotypisierung der gesamten Kohorte von Migränepatienten durchzuführen und die Untergruppen derjenigen Patienten zu vergleichen, die auf die mAbs-Behandlung ansprechen (nämlich diejenigen Patienten, die eine Reduzierung der monatlichen Migränetage um >/= 50 % erreicht haben) im Vergleich zu den Nicht-Patienten -Respoder-Gruppe (nämlich diejenigen Patienten, die eine Reduzierung der monatlichen Migränetage um < 50 % erreicht haben).

Wir werden Neuropeptide, microRNAs, entzündliche Zytokine und Kynurenin-Metaboliten bewerten. Diese Ergebnisse werden die Identifizierung einer Multibiomarker-Panel-Signatur von Migränepatienten ermöglichen, die sich gegen gezielte präventive Behandlungen wehren und möglicherweise andere molekulare Ziele aufdecken.

STUDIENDESIGN:

Diese Studie ist Teil des SPHERA-Projekts mit Mitteln des italienischen Gesundheitsministeriums (GR-2021-12372429). Die Patienten werden aus denjenigen aufgenommen, die die Ambulanz des IRCCS Mondino Institute (Pavia) und die Neurologieabteilung der Universität L'Aquila (Avezzano) besuchen.

Wir werden Daten vor Beginn der mAbs-Behandlung (Baseline-T0) und nach drei Monaten (T1) der mAbs-Behandlung sammeln. Wir identifizieren Repsonder- und Non-Responder-Gruppen und führen dann bei T0 und T1 ein biochemisches Profiling der beiden Untergruppen durch.

METHODEN:

Alle Patienten werden einem biochemischen Profiling unterzogen, das die Analyse von Folgendem umfasst:

• eCBome-System: mRNS-Spiegel von FAAH, MAGL, DAGL, NAPE, NAAA in mononukleären Zellen des peripheren Blutes,
• Plasmaspiegel von AEA, 2-AG, PEA und OEA; CGRP, PACAP und VIP; IL-1beta, TNF-alpha, IL-4 und IL-10; Kynurensäure und Chinolinsäure;
• miR-382-5p, miR-34a, miR-30a und miR-155 in mononukleären Zellen des peripheren Blutes,
• Schrotflintenanalyse der Mikrobiota im Stuhl von Patienten.

Wir werden zwischen 9 und 11 Uhr biochemische Proben entnehmen, um eine Beeinflussung des Tagesrhythmus zu vermeiden. Alle Auswertungen werden in der interiktalen Migränephase durchgeführt.

Die folgenden Erhebungsmethoden werden angewendet:

• mRNA- und microRNA-Analyse in PBMCs. Blutproben werden in Ethylendiamintetraessigsäureröhrchen gesammelt. Wir werden zunächst PBMCs und Gesamt-RNA isolieren. Ubiquitin C und U6 werden als Verwaltungsgene für Gene fungieren, die für die eCBome-Enzyme und miRNAs kodieren.
• Kynurensäure und Chinolinsäure, AEA, PEA, 2-AG und OEA werden gemäß der von Gao veröffentlichten Methode bestimmt (Gao, 2020). Die Kinurenin-Metabolitenspiegel werden gemäß der von Fuertig beschriebenen Methode gemessen (Fuertig, 2016).
• Die CGRP-Alpha-, PACAP-38- und VIP-Spiegel werden mithilfe eines kommerziellen enzymgebundenen Immunosorbens-Assays gemessen
• IL-1beta, TNF-alpha, IL-4, IL-10-Zytokin werden mit dem Ella Automated Immunoassay System mit einem Simple Plex-Assay-Panel gemessen.
• Mikrobiomanalyse: Nach korrekter Entnahme und Konservierung der Stuhlproben werden diese zur DNA-Extraktion an die Translational Neurovaskuläre Forschungseinheit (IRCCS Mondino Foundation) geliefert.

STATISTISCHE ANALYSE Die Berechnung der Stichprobengröße wird für den primären Endpunkt (MAGL-Ausdruck) definiert, während eine Leistungsanalyse für den co-primären Endpunkt (FAAH-Ausdruck) durchgeführt wird.

Nach vorläufigen Daten aus der Arbeit von Greco 2021, die ein Verhältnis zwischen Non-Respondern und Respondern von 2:3 und einer MAGL-Genexpression von 8 ± 10 RQ bei Non-Respondern und 3 ± 4 RQ bei Respondern nahelegen, beträgt die minimale Stichprobengröße 88 Migränepatienten (53 Responder und 35 NON-Responder), um ein Konfidenzintervall von 95 % und eine Trennschärfe von 80 % zu erreichen.

Zur Bewertung parametrischer oder nichtparametrischer Methoden wird eine Normalitätsanalyse durchgeführt.

Wir werden eine univariate Analyse durchführen, um bei T0 nach Unterschieden in demografischen, klinischen und biochemischen Parametern zwischen Non-Responder- und Responder-Gruppen zu suchen. Die wichtigste statistische Analyse umfasst einen multivariaten Ansatz zur Kontrolle von Störfaktoren. Das Signifikanzniveau wird auf Alpha = 0,05 festgelegt, wobei gegebenenfalls eine Korrektur für mehrere Vergleiche berücksichtigt wird.