Биохимический профиль пациентов с мигренью (SPHERA_WP1_1)

Предыдущие данные показали, что эндоканнабидиомная система (eCBome) изменяется у пациентов с мигренью, демонстрируя: i) измененную экспрессию генов катаболизирующих ферментов (MAGL и FAAH) у пациентов с эпизодической и хронической мигренью по сравнению со здоровыми людьми из контрольной группы; ii) измененные периферические уровни эндоканнабиноидоподобного липида пальмитоилэтаноламида (ПЭА) с признаками повышения уровней ПЭА во время острой фазы мигрени.

Несмотря на высокую эффективность и переносимость моноклональных антител МКА, направленных против пептида, родственного гену кальцитонина (МКА), данные РКИ и реальных исследований показывают, что МКА неэффективны у 40% пациентов. Эти пациенты могут иметь независимый от CGRP фенотип, потенциально связанный с дисфункцией eCBome.

Основная цель состоит в том, чтобы провести глубокое фенотипирование всей группы пациентов с мигренью, сравнивая подгруппы тех пациентов, которые будут реагировать на лечение моноклональными антителами (а именно тех пациентов, которые достигли сокращения ежемесячных дней с мигренью >/= 50%) по сравнению с группой без - Группа респодеров (а именно те пациенты, у которых достигнуто сокращение количества дней с мигренью в месяц <50%).

Мы будем оценивать нейропептиды, микроРНК, воспалительные цитокины и метаболиты кинуренина. Эти результаты позволят идентифицировать группу мультибиомаркеров у пациентов с мигренью, устойчивых к целенаправленному профилактическому лечению, и потенциально выявить другие молекулярные мишени.

ДИЗАЙН ИССЛЕДОВАНИЯ:

Это исследование является частью проекта SPHERA, финансируемого Министерством здравоохранения Италии (GR-2021-12372429). Пациенты будут набраны из числа тех, кто посещает амбулаторную клинику Института IRCCS Мондино (Павия) и отделения неврологии Университета Л'Акуила (Авеццано).

Мы будем собирать данные до начала лечения моноклональными антителами (исходный уровень-Т0) и через три месяца (Т1) лечения моноклональными антителами. Мы определим группы репсондеров и нереспондентов, а затем проведем биохимическое профилирование двух подгрупп на уровне T0 и T1.

МЕТОДЫ:

Всем пациентам будет проведено биохимическое исследование, которое будет включать анализ:

• Система eCBome: уровни мРНК FAAH, MAGL, DAGL, NAPE, NAAA в мононуклеарных клетках периферической крови,
• уровни AEA, 2-AG, PEA и OEA в плазме; CGRP, PACAP и VIP; IL-1бета, TNF-альфа, IL-4 и IL-10; кинуреновая и хинолиновая кислоты;
• миР-382-5p, миР-34а, миР-30а и миР-155 в мононуклеарных клетках периферической крови,
• дробовой анализ микробиоты в фекалиях пациентов.

Мы будем собирать биохимические пробы между 9 и 11 часами утра, чтобы избежать влияния циркадных ритмов. Все оценки будут проводиться в межприступной фазе мигрени.

Будут приняты следующие методы сбора:

• Анализ мРНК и микроРНК в РВМС. Образцы крови будут собраны в пробирки с этилендиаминтетрауксусной кислотой, сначала мы изолируем РВМС и общую РНК. Убиквитин C и U6 будут действовать как гены «домашнего хозяйства» для генов, кодирующих ферменты eCBome и микроРНК.
• кинуреновая кислота и хинолиновая кислота, AEA, PEA, 2-AG и OEA будут определяться в соответствии с опубликованным методом Гао (Gao, 2020). Уровни метаболита кинуренина будут измеряться в соответствии с методом, описанным Фуэртигом (Fuertig, 2016).
• Уровни CGRP-альфа, PACAP-38 и VIP будут измеряться с использованием коммерческого иммуноферментного анализа.
• Цитокины IL-1beta, TNF-альфа, IL-4, IL-10 будут измеряться с помощью автоматизированной системы иммуноанализа Ella с панелью для анализа Simple Plex.
• Анализ микробиома: после правильного сбора и сохранения образцов стула они будут доставлены в Отдел трансляционных нейрососудистых исследований (IRCCS Mondino Foundation) для выделения ДНК.

СТАТИСТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ Расчет размера выборки определяется для основного результата (выражение MAGL), тогда как анализ мощности выполняется для сопутствующего основного результата (выражение FAAH).

Согласно предварительным данным работы Greco 2021, предполагающим соотношение между неответившими и респондерами: 2:3 и экспрессией гена MAGL: 8±10 RQ у неответивших и 3±4 RQ у респондеров, минимальный размер выборки составляет 88 пациентов с мигренью (53 ответивших и 35 не ответивших) для того, чтобы иметь доверительный интервал 95% и мощность 80%.

Анализ нормальности будет выполняться для оценки параметрических или непараметрических методов.

Мы проведем одномерный анализ для поиска различий в демографических, клинических и биохимических параметрах между группами нереагировавших и реагировавших на Т0. Основной статистический анализ будет включать многомерный подход к контролю факторов, искажающих результаты. Уровень значимости будет установлен на уровне альфа = 0,05 с учетом поправки на множественные сравнения, где это необходимо.