Biokjemisk profilering av migrenepasienter (SPHERA_WP1_1)

Tidligere bevis viste at endokannabidiomsystemet (eCBome) er endret hos migrenepasienter, noe som viser: i) endret genuttrykk av kataboliserende enzymer (MAGL og FAAH) hos pasienter med episodisk og kronisk migrene sammenlignet med friske kontroller; ii) endrede perifere nivåer av endocannabinoid-lignende lipid palmitoylethanolamid (PEA) med tegn på økte PEA-nivåer under den akutte migrenefasen.

Til tross for den høye effektiviteten og toleransen til monoklonale antistoffer mot mAbs rettet mot det kalsitoningenrelaterte peptidet (mAbs), viser bevis fra RCT-er og virkelige studier at mAbs svikter hos 40 % av pasientene. Disse pasientene kan ha en ikke-CGRP-avhengig fenotype, potensielt knyttet til eCBome-dysfunksjon.

Primært mål er å utføre en dyp fenotyping av hele kohorten av migrenepasienter ved å sammenligne undergruppene til de pasientene som skal respondere på mAbs-behandling (nemlig de pasientene som oppnådde en reduksjon av månedlige migrenedager >/= 50%) sammenlignet med ikke -Respodergruppe (nemlig de pasientene som oppnådde en reduksjon av månedlige migrenedager < 50%) .

Vi vil evaluere nevropeptider, mikroRNA, inflammatoriske cytokiner og kynureninmetabolitter. Disse funnene vil tillate identifisering av en multibiomarkørpanelsignatur av migrenepasienter som motsetter seg spesifikt målrettede forebyggende behandlinger og potensielt avslører andre molekylære mål.

STUDIEDESIGN:

Denne studien er en del av SPHERA-prosjektet med finansiering fra det italienske helsedepartementet (GR-2021-12372429). Pasienter vil bli registrert fra de som går på poliklinikken til IRCCS Mondino Institute (Pavia) og nevrologisk avdeling ved University of L'Aquila (Avezzano).

Vi vil samle inn data før mAbs starter (baseline-T0) og etter tre måneder (T1) med mAbs-behandling. Vi vil identifisere Repsonder- og Non-responder-grupper, og vi utfører deretter biokjemisk profilering av de to undergruppene ved T0 og T1.

METODER:

Alle pasienter vil gjennomgå en biokjemisk profilering som vil inkludere analyse av:

• eCBome-system: mRNS-nivåer av FAAH, MAGL, DAGL, NAPE, NAAA i perifere mononukleære blodceller,
• plasmanivåer av AEA, 2-AG, PEA og OEA; CGRP, PACAP og VIP; IL-1beta, TNF-alfa, IL-4 og IL-10; kynureniske og kinolinsyrer;
• miR-382-5p, miR-34a, miR-30a og miR-155 i mononukleære celler i perifert blod,
• hagleanalyse av mikrobiota i pasientenes avføring.

Vi vil ta biokjemiske prøver mellom kl. 9 og 11 for å unngå påvirkning av døgnrytmen. All evaluering vil bli utført i migrene interiktal fase.

Følgende innsamlingsmetoder vil bli tatt i bruk:

• mRNA- og mikroRNA-analyse i PBMC-er. Blodprøver vil bli samlet i etylendiamin-tetra-eddiksyrerør, vi vil først isolere PBMC-er og totalt RNA. Ubiquitin C og U6 vil fungere som husholdningsgener for gener som koder for eCBome-enzymer og miRNA-er.
• kynurensyre og kinolinsyre, AEA, PEA, 2-AG og OEA vil bli bestemt etter Gao publiserte metode (Gao, 2020). Nivåer av kinureninmetabolitt vil bli målt i henhold til metoden beskrevet av Fuertig (Fuertig, 2016).
• CGRP alfa-, PACAP-38- og VIP-nivåer vil bli målt ved hjelp av en kommersiell enzymkoblet immunsorbentanalyse
• IL-1beta, TNF-alfa, IL-4, IL-10 cytokin vil bli målt av Ella Automated Immunoassay System med et Simple Plex-analysepanel.
• Mikrobiomanalyse: etter korrekt innsamling og konservering av avføringsprøver, vil de bli levert til Translational Neurovascular Research Unit (IRCCS Mondino Foundation) for DNA-ekstraksjon.

STATISTISK ANALYSE Prøvestørrelsesberegning er definert for primært utfall (MAGL-uttrykk), mens det utføres en potensanalyse for co-primært utfall (FAAH-uttrykk).

I følge foreløpige data fra arbeidet til Greco 2021 som antyder et forhold mellom ikke-respondere og respondere: 2:3 og MAGL-genuttrykk: 8±10 RQ hos ikke-respondere og 3±4 RQ hos respondere, er minste prøvestørrelse på 88 migrenepasienter (53 Responders og 35 NON-Respondere) for å ha et konfidensintervall på 95 % og kraft på 80 %.

Normalitetsanalyse vil bli utført for å evaluere parametriske eller ikke-parametriske metoder.

Vi vil utføre en univariat analyse for å søke etter forskjeller i demografiske, kliniske og biokjemiske parametere mellom ikke-responder- og respondergrupper ved T0. Hovedstatistisk analyse vil inkludere en multivariat tilnærming til kontroll for konfoundere. Signifikansnivået vil bli satt til alfa = 0,05 med tanke på korreksjon for flere sammenligninger der det er hensiktsmessig.