CD34+細胞上の原発性骨髄線維症患者の間葉系間質細胞の役割由来細胞外小胞由来

原発性骨髄線維症（PMF）は、CD34+前駆細胞のクローン増殖を特徴とする慢性骨髄増殖性腫瘍です。 JAK2、MPL、またはCALR遺伝子のいずれかで機能した関数変異を獲得したため、JAK-STAT経路の構成的活性化は、関連する病原性の役割を果たします。 さらに、慢性炎症の状態が病気のコースに影響を与えます。 現在、JAK阻害剤のルキソリチニブによる治療は、病的細胞クローンに影響を与えずに疾患の症状を改善しています。造血前駆細胞（HPC）移植が唯一の治療オプションです。 研究者は、以前に、PMFが機能的および遺伝的異常を示した患者からの間葉系間質細胞（MSC）を発表しました（低増殖潜在能力、早熟な老化、分化の可能性の低下）。 ルキソリチニブに関しては、JAK-statシグナル伝達の阻害、健康なドナー（HD）とPMF-MSCの両方の成長、線維症関連遺伝子発現の減少など、MSCに対する直接的な影響が報告されています。 ルキソリチニブは、炎症性サイトカインMCP-1およびIL-6のMSC分泌を減少させることも報告されており、骨髄（BM）微小環境の変更におけるこの薬の役割を示唆しています。 PMFでは、他の血液悪性腫瘍と同様に、MSCは微小環境とCD34+細胞の間のコミュニケーションに参加します。 最近の研究では、MSC由来の細胞外小胞（EV）と親MSCが同様の効果があることが他の病理学で実証されました。 実際、mRNA、microRNA、脂質、タンパク質を含むEVは、レシピエント細胞に組み込まれ、その機能を修正できます。 正常な造血では、CD34+細胞へのMSC-EVの取り込みは、リン酸-Stat5のレベルの増加を通じてJAK-STAT経路の活性化を誘導することが示されています。さらに、アポトーシスの有意な減少とより高いコロニー形成単位顆粒球/マクロファージクローン原性能力が報告されています。

この研究の目的は次のとおりです。

• PMF患者およびHDSのBMからMSCを分離します。 MSCは、ルキソリチニブとインキュベートされます。 EVはMSCの飢vと超遠心分離後に得られ、-80°Cで保存されます
• アポトーシスおよび活性化経路、ROS産生およびクローン原性能力の評価により、HD-CD34+またはJAK2V617F+ SET2細胞のEV効果を評価する。 この点で、Ruxolitinibを投与または依存していない患者からのJAK2変異CD34+細胞を使用して、確認実験を実施します。
• EVとのインキュベーション後、CD34+およびSET2細胞で遺伝子発現プロファイルを実行します。
• EV Biocargoを調査するために、QRT-PCRとプロテオミクスの両方が、ルキソリチニブとのインキュベーションの前後にMSC由来のEVで実行されます。

予想される影響には、HPCに対する変化したマイクロ環境の効果を反映した、HD-MSC-EVSに関するPMF-MSC-EVSとのインキュベーション後のCD34+またはSET2細胞の機能活性の修正の特定が含まれます。 研究者はまた、異なるソースからEVを組み込んだCD34+またはSET2細胞の遺伝子発現プロファイルを評価することにより、疾患の重症度/進行の重要な標的の認識を期待しています。

さらに、PMF BM微小環境に対するルキソリチニブ効果の同定は明らかになる可能性があります。

この研究では、疾患の進行の新しい標的に作用するか、健康なCD34+細胞の生存を支持したり、クローンの対応物に対して作用したりする無細胞療法としてのHD-EVの将来の使用をサポートすることができます。