Rol van mesenchymale stromale cel afgeleide extracellulaire blaasjes van primaire myelofibrose -patiënten op CD34+ cellen

Primaire myelofibrose (PMF) is een chronisch myeloproliferatief neoplasma gekenmerkt door de klonale proliferatie van CD34+ voorlopercellen. Een constitutieve activering van de JAK-stat-route, vanwege een verkregen winst van functiemutatie, hetzij in JAK2-, MPL- of CALR-genen, speelt een relevante pathogenetische rol. Bovendien beïnvloedt een staat van chronische ontsteking het verloop van de ziekte. Momenteel verbetert de therapie met de JAK -remmer ruxolitinib de symptomen van de ziekte, zonder effecten op de pathologische celkloon; Hematopoietische voorlopercel (HPC) transplantatie is de enige curatieve optie. De eerder gepubliceerde onderzoekers publiceerden dat mesenchymale stromale cellen (MSC's) van patiënten met PMF functionele en genetische afwijkingen vertonen (lage proliferatief potentieel, vroegrijpe senescentie, verminderd differentiatiepotentieel). Wat betreft ruxolitinib zijn directe effecten op MSC's beschreven, zoals de remming van de JAK-STAT-signalering, de groei van zowel gezonde donor (HD)-als PMF-MSC's en de afname van fibrose gerelateerde genexpressie. Van ruxolitinib is ook gerapporteerd dat het de MSC-secretie van inflammatoire cytokines MCP-1 en IL-6 vermindert, hetgeen een rol van dit medicijn suggereert bij het wijzigen van de micro-omgeving van het beenmerg (BM). In PMF, net als bij andere hematologische maligniteiten, nemen MSC's deel aan de communicatie tussen micro -omgeving en CD34+ -cellen. Recente studies hebben in andere pathologieën aangetoond dat MSC-afgeleide extracellulaire blaasjes (EV's) en ouderlijke MSC's vergelijkbare effecten hebben. In feite kunnen EV's, die mRNA, microRNA, lipiden en eiwitten bevatten, worden opgenomen in ontvangende cellen en hun functies wijzigen. Bij normale hematopoëse is aangetoond dat MSC-EV-opname in CD34+ -cellen een activering van de JAK-stat-route induceert door verhoogde niveaus van fosfo-STAT5; Bovendien is een significante afname van apoptose en een hogere kolonievormende eenheid granulocyten/macrofaag clonogeen potentieel gemeld.

De doelstellingen van deze studie zijn:

• om MSC's te isoleren van BM van PMF -patiënten en HDS. MSC's worden geïncubeerd met/uit ruxolitinib. EV's zullen worden verkregen na MSC -honger en ultracentrifugaties, en opgeslagen bij -80 ° C
• Om EV-effecten op HD-CD34+ of JAK2V617F+ SET2-cellen te beoordelen door evaluatie van apoptotische en activeringsroutes, ROS-productie en clonogene capaciteit. In dit opzicht zullen bevestigende experimenten worden uitgevoerd met JAK2-gemuteerde CD34+ -cellen van patiënten die al dan niet ruxolitinib ontvangen.
• om genexpressieprofiel uit te voeren op CD34+ en set2 -cellen na incubatie met EV's.
• Het onderzoeken van EV-biocargo's zullen zowel QRT-PCR als proteomics worden uitgevoerd op MSC-afgeleide EV's, voor en na incubatie met ruxolitinib.

De verwachte impact zal de identificatie van modificaties in functionele activiteiten van CD34+ of SET2-cellen omvatten na incubatie met PMF-MSC-EV's met betrekking tot HD-MSC-EV's, het effect van het effect van een veranderde micro-omgeving op HPC's. De onderzoekers verwachten ook de herkenning van belangrijke doelen van ernst/progressie van de ziekte door het genexpressieprofiel in CD34+ of SET2 -cellen te beoordelen die EV's uit verschillende bronnen bevatten.

Bovendien kan de identificatie van de ruxolitinib -effecten op PMF BM -micro -omgeving worden opgehelderd.

Deze studie kan het mogelijk maken om te werken op nieuwe doelen van ziekteprogressie of om het toekomstige gebruik van HD-EV's te ondersteunen als een acellulaire therapie die de overleving van gezonde CD34+ -cellen bevordert of tegen hun klonale tegenhanger werkt.