Papel das vesículas extracelulares derivadas de células estromais mesenquimais de pacientes com mielofibrose primária em células CD34+

A mielofibrose primária (PMF) é uma neoplasia mieloproliferativa crônica caracterizada pela proliferação clonal de células progenitoras CD34+. Uma ativação constitutiva da via JAK-STAT, devido a um ganho adquirido da mutação da função nos genes JAK2, MPL ou CALR, desempenha um papel patogenético relevante. Além disso, um estado de inflamação crônica afeta o curso da doença. Atualmente, a terapia com o inibidor de JAK ruxolitinibe melhora os sintomas da doença, sem efeitos no clone das células patológicas; O transplante de células progenitoras hematopoiéticas (HPC) é a única opção curativa. Os investigadores publicaram anteriormente que as células estromais mesenquimais (CTMs) de pacientes com PMF exibem anormalidades funcionais e genéticas (baixo potencial proliferativo, senescência precoce, potencial de diferenciação reduzido). Em relação ao ruxolitinibe, foram descritos efeitos diretos nas CTMs, como a inibição da sinalização de JAK-STAT, o crescimento de doadores saudáveis ​​(HD)-e PMF-MSCs e a diminuição da expressão gênica relacionada à fibrose. Também foi relatado que o ruxolitinibe reduz a secreção de MSC de citocinas inflamatórias MCP-1 e IL-6, sugerindo um papel desse medicamento na modificação do microambiente da medula óssea (BM). No PMF, como em outras neoplasias hematológicas, as CTMs participam da comunicação entre o microambiente e as células CD34+. Estudos recentes demonstraram em outras patologias que as vesículas extracelulares derivadas de CTM (VEs) e as CTMs dos pais têm efeitos semelhantes. De fato, os VEs, contendo mRNA, microRNA, lipídios e proteínas podem ser incorporados às células do destinatário e modificar suas funções. Na hematopoiese normal, a incorporação de MSC-EV nas células CD34+ demonstrou induzir uma ativação da via JAK-STAT através de níveis aumentados de fosfo-estatus5; Além disso, foram relatadas uma diminuição significativa da apoptose e uma maior unidade de granulócitos/potencial clonogênico de macrófagos.

Os objetivos deste estudo são:

• isolar MSCs de BM de pacientes com PMF e HDs. As CTMs serão incubadas com/fora do ruxolitinibe. Os VEs serão obtidos após a fome de mestrado e ultracentrifugações e armazenados a -80 ° C
• Para avaliar os efeitos de EV nas células HD-CD34+ ou JAK2V617F+ SET2 por avaliação de vias apoptóticas e de ativação, produção de ERO e capacidade clonogênica. A esse respeito, experimentos confirmatórios serão realizados com células CD34+ mutadas por JAK2 de pacientes que recebem ou não o ruxolitinibe.
• Para realizar o perfil de expressão gênica nas células CD34+ e SET2 após a incubação com EVs.
• Para investigar os biocargo de EV, o qRT-PCR e a proteômica serão realizados em EVs derivados de MSC, antes e após a incubação com o ruxolitinibe.

O impacto esperado incluirá a identificação de modificações nas atividades funcionais das células CD34+ ou SET2 após a incubação com PMF-MSC-EVs em relação ao HD-MSC-EVS, refletindo o efeito de um microambiente alterado nos HPCs. Os pesquisadores também esperam o reconhecimento de alvos importantes de gravidade/progressão da doença, avaliando o perfil de expressão gênica nas células CD34+ ou SET2 que incorporam EVs de diferentes fontes.

Além disso, a identificação dos efeitos do ruxolitinibe no microambiente PMF BM pode ser esclarecida.

Este estudo pode permitir agir sobre novos alvos de progressão da doença ou apoiar o uso futuro de HD-EVs como uma terapia acelular que favorece a sobrevivência de células CD34+ saudáveis ​​ou age contra sua contraparte clonal.