Úloha mezenchymálních stromálních buněk odvozených od extracelulárních vezikul primárních myelofibrózů na CD34+ buňkách

Primární myelofibróza (PMF) je chronická myeloproliferativní novotvar charakterizovaná klonální proliferací progenitorových buněk CD34+. Konstitutivní aktivace dráhy JAK-STAT, v důsledku získaného zisku funkční mutace buď v genech JAK2, MPL nebo CALR, hraje relevantní patogenetickou roli. Navíc stav chronického zánětu ovlivňuje průběh nemoci. V současné době terapie inhibitorem JAK ruxolitinib zmírňuje příznaky onemocnění bez účinků na klon patologických buněk; Jedinou léčebnou možností je transplantace hematopoetické progenitorové buňky (HPC). Vyšetřovatelé dříve zveřejnili, že mezenchymální stromální buňky (MSC) od pacientů s PMF vykazují funkční a genetické abnormality (nízký proliferativní potenciál, předčasný stárnutí, snížený diferenciační potenciál). Pokud jde o ruxolitinib, byly popsány přímé účinky na MSC, jako je inhibice signalizace JAK-STAT, růst zdravého dárce (HD)-a PMF-MSC a snížení exprese genu související s fibrózou. Bylo také popsáno, že ruxolitinib snižuje sekreci MSC zánětlivých cytokinů MCP-1 a IL-6, což naznačuje roli tohoto léčiva při modifikaci mikroprostředí kostní dřeně (BM). V PMF, stejně jako v jiných hematologických malignitách, se MSC účastní komunikace mezi mikroprostředí a CD34+ buňkami. Nedávné studie prokázaly v jiných patologiích, že extracelulární vezikuly odvozené od MSC (EV) a rodičovské MSC mají podobné účinky. Ve skutečnosti mohou být EV, obsahující mRNA, mikroRNA, lipidy a proteiny začleněny do buněk příjemce a modifikovat jejich funkce. U normální hematopoézy bylo prokázáno, že inkorporace MSC-EV do CD34+ buněk vyvolává aktivaci JAK-STATské dráhy zvýšenou hladinou fosfo-STAT5; Kromě toho bylo popsáno významné snížení apoptózy a vyššího klonogenního potenciálu vytvářející kolonii/makrofág.

Cíle této studie jsou:

• izolovat MSC od BM pacientů s PMF a HDS. MSC budou inkubovány s/out ruxolitinib. EV bude získáno po hladovění a ultracentrifugacích MSC a uložena při -80 ° C
• Posoudit účinky EV na HD-CD34+ nebo JAK2V617F+ SET2 buňky hodnocením apoptotických a aktivačních drah, produkce ROS a klonogenní kapacity. V tomto ohledu budou prováděny potvrzující experimenty s buňkami CD34+ mutovanými JAK2 od pacientů, kteří dostávali nebo ne ruxolitinib.
• Pro provádění genové exprese profilu na buňkách CD34+ a SET2 po inkubaci s EV.
• Pro zkoumání EV biokargoů bude provedeno jak qRT-PCR, tak proteomiky na EV odvozených od MSC, před a po inkubaci s ruxolitinibem.

Očekávaný dopad bude zahrnovat identifikaci modifikací ve funkčních aktivitách buněk CD34+ nebo SET2 po inkubaci s PMF-MSC-EVS s ohledem na HD-MSC-EVS, což odráží účinek změněného mikroprostředí na HPC. Vyšetřovatelé také očekávají rozpoznávání důležitých cílů závažnosti/progrese onemocnění posouzením profilu genové exprese v CD34+ nebo SET2 buňkách, které zahrnují EV z různých zdrojů.

Kromě toho může být objasněna identifikace účinku ruxolitinibu na mikroprostředí PMF BM.

Tato studie může umožnit působit na nové cíle progrese onemocnění nebo podporovat budoucí používání HD-EVS jako acelulární terapie, která upřednostňuje přežití zdravých CD34+ buněk nebo působí proti jejich klonálnímu protějšku.