Rola mezenchymalnych pęcherzyków pozakomórkowych pochodnych komórek zrębowych pacjentów z pierwotnym obciążeniem szpikowym na komórkach CD34+

Pierwotna przepis mieści (PMF) jest przewlekłym nowotworem szpiku mieloproliferacyjnego charakteryzującego się klonalną proliferacją komórek progenitorowych CD34+. Konstytutywna aktywacja szlaku JAK-STAT, ze względu na nabyte wzmocnienie mutacji funkcji w genach JAK2, MPL lub CALR, odgrywa odpowiednią rolę patogenetyczną. Ponadto stan przewlekłego stanu zapalnego wpływa na przebieg choroby. Obecnie terapia z inhibitorem JAK ruksolitinibem poprawia objawy choroby, bez wpływu na patologiczny klon komórkowy; Przeszczep hematopoetycznych komórek progenitorowych (HPC) jest jedyną opcją leczniczą. Badacze opublikowali wcześniej, że mezenchymalne komórki zrębu (MSC) od pacjentów z PMF wykazują nieprawidłowości funkcjonalne i genetyczne (niski potencjał proliferacyjny, przedwczesne starzenie, zmniejszone potencjał różnicowania). W odniesieniu do ruxolitinib opisano bezpośredni wpływ na MSC, taki jak hamowanie sygnalizacji JAK-Stat, wzrost zarówno zdrowego dawcy (HD)-i PMF-MSC oraz spadek ekspresji genów związanych z zwłóknieniem. Doniesiono również, że Ruxolitinib zmniejsza wydzielanie MSC cytokin zapalnych MCP-1 i IL-6, co sugeruje rolę tego leku w modyfikowaniu mikrośrodowiska szpiku kostnego (BM). W PMF, podobnie jak w innych nowotworach hematologicznych, MSC uczestniczą w komunikacji między mikrośrodowisko a komórkami CD34+. Ostatnie badania wykazały w innych patologiach, że pęcherzyki pozakomórkowe (EV) i MSC pochodzące z MSC mają podobne skutki. W rzeczywistości EV, zawierające mRNA, mikroRNA, lipidy i białka mogą być włączone do komórek biorców i modyfikować ich funkcje. W normalnym hematopoiesis wykazano, że włączenie MSC-EV w komórkach CD34+ indukuje aktywację szlaku JAK-STAT poprzez zwiększone poziomy fosfo-stat5; Ponadto odnotowano znaczny spadek apoptozy i wyższy potencjał granulocytów/makrofagów.

Celem tego badania są:

• w celu izolacji MSC od BM pacjentów z PMF i HDS. MSC zostaną inkubowane z/Out Ruxolitinib. EV zostaną uzyskane po głodzie MSC i ultrafentrifugacji i przechowywane w -80 ° C
• Aby ocenić wpływ EV na komórki HD-CD34+ lub JAK2V617F+ SET2 poprzez ocenę szlaków apoptotycznych i aktywacyjnych, produkcji ROS i zdolności klonogennej. W tym względzie eksperymenty potwierdzające zostaną przeprowadzone z komórkami CD34+ z rozmieszczonymi przez JAK2 od pacjentów otrzymujących lub nie ruksolitynib.
• Aby wykonać profil ekspresji genów na komórkach CD34+ i SET2 po inkubacji z EV.
• Aby zbadać biokargo EV, zarówno QRT-PCR, jak i proteomika będą wykonywane na EV pochodzących z MSC przed i po inkubacji z ruxolitinibem.

Oczekiwany wpływ obejmie identyfikację modyfikacji w aktywności funkcjonalnych komórek CD34+ lub SET2 po inkubacji z PMF-MSC-EVS w odniesieniu do HD-MSC-EV, co odzwierciedla wpływ zmienionego mikrośrodowiska na HPC. Badacze oczekują również rozpoznania ważnych celów nasilenia/postępu choroby, oceniając profil ekspresji genów w komórkach CD34+ lub SET2, które zawierają EV z różnych źródeł.

Ponadto można wyjaśnić identyfikację wpływu ruxolitinib na mikrośrodowisko PMF BM.

Badanie to może pozwolić na działanie na nowe cele postępu choroby lub wspierać przyszłe wykorzystanie HD-EV jako terapię bezkomórkową, która sprzyja przeżyciu zdrowych komórek CD34+ lub działa przeciwko ich klonalnym odpowiednikowi.