Primaaristen myelofibroosipotilaiden mesenkymaalisten stroomasolujen rooli CD34+ -soluissa

Primaarinen myelofibroosi (PMF) on krooninen myeloproliferatiivinen kasvatus, jolle on ominaista CD34+ -progenitorisolujen kloonaalinen lisääntyminen. JAK-STAT-reitin konstitutiivisella aktivoinnilla johtuen funktiomutaation hankitusta vahvistuksesta joko JAK2-, MPL- tai CALR-geeneissä on merkityksellinen patogeneettinen rooli. Lisäksi kroonisen tulehduksen tila vaikuttaa sairauskurssiin. Tällä hetkellä JAK -estäjällä oleva terapia ruxolitinibillä parantaa taudin oireita ilman vaikutuksia patologiseen soluklooniin; Hematopoieettinen progenitorisolu (HPC) -siirto on ainoa parantava vaihtoehto. Tutkijat ovat aiemmin julkaissut, että mesenkymaalisilla stroomasoluilla (MSC) potilailta, joilla on PMF, on funktionaalisia ja geneettisiä poikkeavuuksia (alhainen proliferatiivinen potentiaali, varhainen vanhentuminen, vähentynyt erilaistumispotentiaali). Ruxolitinibin suhteen on kuvattu suorat vaikutukset MSC: iin, kuten JAK-STAT-signaloinnin estäminen, sekä terveiden luovuttajien (HD)-että PMF-MSC: ien kasvu että fibroosiin liittyvän geeniekspression väheneminen. Ruxolitinibin on myös ilmoitettu vähentävän tulehduksellisten sytokiinien MCP-1: n ja IL-6: n MSC: n eritystä, mikä viittaa tämän lääkkeen rooliin luuytimen (BM) mikroympäristön modifioinnissa. PMF: ssä, kuten muissa hematologisissa pahanlaatuisissa kasvaimissa, MSC: t osallistuvat mikroympäristön ja CD34+ -solujen väliseen viestintään. Viimeaikaiset tutkimukset osoittivat muissa patologioissa, että MSC: stä johdetuilla solunulkoisilla rakkuloilla (EV) ja vanhempien MSC: llä on samanlaisia ​​vaikutuksia. Itse asiassa EV: t, jotka sisältävät mRNA: ta, mikroRNA: ta, lipidejä ja proteiineja, voidaan sisällyttää vastaanottajasoluihin ja modifioida niiden toimintoja. Normaalissa hematopoieesissa MSC-EV: n sisällyttämisen CD34+ -soluihin on osoitettu indusoivan JAK-STAT-reitin aktivoitumisen lisääntyneiden fosfo-STAT5-tasojen läpi; Lisäksi on ilmoitettu apoptoosin ja korkeamman pesäkkeiden muodostavan yksikön granulosyyttien/makrofagien klonogeenisen potentiaalin vähenemistä.

Tämän tutkimuksen tavoitteet ovat:

• Eristämään MSC: t PMF -potilaiden ja HD -potilaiden BM: stä. MSC: tä inkuboivat/out ruxolitinibin kanssa. EV: t saadaan MSC -nälkään ja ultrasentrifugaatioiden jälkeen ja säilytetään -80 ° C: ssa
• EV-vaikutusten arvioimiseksi HD-CD34+ tai JAK2V617F+ SET2 -soluihin arvioimalla apoptoottisia ja aktivointireittejä, ROS-tuotantoa ja klonogeenisiä kapasiteettia. Tältä osin varmistuskokeet suoritetaan JAK2-mutatoituneilla CD34+ -soluilla potilailta, jotka saavat tai eivät ole ruxolitinibia.
• Geeniekspressioprofiilin suorittaminen CD34 +- ja SET2 -soluissa inkubaation jälkeen EVS: n kanssa.
• EV: n biokarkojen tutkimiseksi sekä QRT-PCR että proteomiikka suoritetaan MSC: stä johdetuille EV: ille ennen ja jälkeen inkubointia ruxolitinibin kanssa.

Odotettuun vaikutukseen sisältyy modifikaatioiden tunnistaminen CD34 +- tai SET2-solujen toiminnallisissa aktiivisuuksissa inkubaation jälkeen PMF-MSC-EVS: n kanssa HD-MSC-EVS: n suhteen, mikä heijastaa muutetun mikroympäristön vaikutusta HPC: iin. Tutkijat odottavat myös taudin vakavuuden/etenemisen tärkeiden kohteiden tunnistamista arvioimalla geeniekspressioprofiilia CD34 +- tai SET2 -soluissa, jotka sisältävät EV: t eri lähteistä.

Lisäksi Ruxolitinib -vaikutusten tunnistaminen PMF BM -mikroympäristöön voidaan selventää.

Tämä tutkimus voi antaa mahdollisuuden toimia uusien taudin etenemisen kohteisiin tai tukea HD-EVS: n tulevaa käyttöä solunkysymyksenä, joka suosii terveiden CD34+ -solujen eloonjäämistä tai toimii niiden kloonaalisessa vastineessa.