Rollen av mesenkymal stromalcelle avledet ekstracellulære vesikler av primære myelofibrose pasienter på CD34+ celler

Primær myelofibrose (PMF) er en kronisk myeloproliferativ neoplasma preget av den klonale spredningen av CD34+ stamceller. En konstitutiv aktivering av JAK-Stat-banen, på grunn av en ervervet gevinst av funksjonsmutasjon enten i JAK2, MPL- eller CALR-gener, spiller en relevant patogenetisk rolle. Dessuten påvirker en tilstand av kronisk betennelse sykdomsforløpet. For øyeblikket forbedrer terapien med JAK -hemmeren Ruxolitinib symptomene på sykdommen, uten effekter på den patologiske celleklonen; Hematopoietisk stamfadercelle (HPC) -transplantasjon er det eneste kurative alternativet. Etterforskerne publiserte tidligere at mesenkymale stromalceller (MSCs) fra pasienter med PMF viser funksjonelle og genetiske abnormiteter (lav proliferativt potensial, fremtredende senescens, redusert differensieringspotensial). Når det gjelder Ruxolitinib, er direkte effekter på MSC-er blitt beskrevet, for eksempel hemming av JAK-STAT-signalering, veksten av både sunn donor (HD)-og PMF-MSC, og reduksjonen av fibrose-relatert genuttrykk. Ruxolitinib er også rapportert å redusere MSC-sekresjon av inflammatoriske cytokiner MCP-1 og IL-6, noe som antyder en rolle som dette stoffet i å modifisere benmargen (BM) mikro-miljøet. I PMF, som i andre hematologiske maligniteter, deltar MSC -er i kommunikasjonen mellom mikro -miljø og CD34+ celler. Nyere studier demonstrerte i andre patologier at MSC-avledede ekstracellulære vesikler (EV) og foreldres MSC har lignende effekter. Faktisk kan EV -er, som inneholder mRNA, mikroRNA, lipider og proteiner, inkorporeres i mottakerceller og modifiserer funksjonene deres. I normal hematopoiesis har MSC-EV-inkorporering i CD34+ celler vist seg å indusere en aktivering av JAK-Stat-banen gjennom økte nivåer av fosfo-STAT5; I tillegg er det rapportert om en betydelig reduksjon i apoptose og en høyere kolonidannende enhet granulocytt/makrofag klonogent potensial.

Målene med denne studien er:

• å isolere MSC fra BM av PMF -pasienter og HDS. MSCs vil bli inkubert med/ut ruxolitinib. EV -er vil bli oppnådd etter MSC -sult og ultracentrifugasjoner, og lagret ved -80 ° C
• For å vurdere EV-effekter på HD-CD34+ eller JAK2V617F+ SET2-celler ved evaluering av apoptotiske og aktiveringsveier, ROS-produksjon og klonogen kapasitet. I denne forbindelse vil bekreftende eksperimenter bli utført med JAK2-muterte CD34+ -celler fra pasienter som mottar eller ikke Ruxolitinib.
• For å utføre genuttrykksprofil på CD34+ og SET2 -celler etter inkubasjon med EVs.
• For å undersøke EV-biokargoer vil både qRT-PCR og proteomikk bli utført på MSC-avledede EV-er, før og etter inkubasjon med Ruxolitinib.

Den forventede effekten vil omfatte identifisering av modifikasjoner i funksjonelle aktiviteter av CD34+ eller SET2-celler etter inkubasjon med PMF-MSC-EVs med hensyn til HD-MSC-EVs, noe som gjenspeiler effekten av et endret mikro-miljø på HPCs. Etterforskerne forventer også at anerkjennelse av viktige mål for alvorlighetsgrad/progresjon av sykdommen ved å vurdere genuttrykksprofilen i CD34+ eller SET2 -celler som inneholder EV -er fra forskjellige kilder.

I tillegg kan identifiseringen av ruxolitinib -effektene på PMF BM mikro -miljø bli avklart.

Denne studien kan tillate å virke på nye mål for sykdomsprogresjon eller å støtte fremtidig bruk av HD-EVs som en acellulær terapi som favoriserer overlevelsen av sunne CD34+ -celler eller virker mot deres klonale motstykke.