Роль мезенхимальных стромальных клеток внеклеточных везикул пациентов с первичным миелофиброзом на клетках CD34+

Первичный миелофиброз (PMF) представляет собой хроническую миелопролиферативную новообразование, характеризующуюся клональной пролиферацией клеток -предшественников CD34+. Конститутивная активация пути Jak-Stat из-за приобретенного усиления функциональной мутации либо в генах JAK2, MPL или CALR, играет соответствующую патогенетическую роль. Более того, состояние хронического воспаления влияет на курс заболевания. В настоящее время терапия с ингибитором JAK Ruxolitinib улучшает симптомы заболевания, без влияния на клон патологических клеток; Трансплантация гематопоэтической клетки -предшественника (HPC) является единственным лечебным вариантом. Исследователи ранее опубликовали, что мезенхимальные стромальные клетки (MSC) от пациентов с PMF демонстрируют функциональные и генетические нарушения (низкий пролиферативный потенциал, преждевременное старение, снижение потенциала дифференцировки). Что касается руксолитиниба, было описано прямое влияние на МСК, такие как ингибирование передачи сигналов JAK-Stat, рост как здорового донора (HD), так и PMF-MSC, а также снижение экспрессии генов, связанных с фиброзом. Также сообщалось, что руксолитиниб снижает секрецию MSC воспалительных цитокинов MCP-1 и IL-6, что указывает на роль этого препарата в модификации микроокружения костного мозга (BM). В PMF, как и в других гематологических злокачественных новообразованиях, MSC участвуют в связи между микроокружением и клетками CD34+. Недавние исследования продемонстрировали в других патологиях, что внеклеточные везикулы (EV), полученные из MSC, и родительские MSC оказывают сходные эффекты. Фактически, EV, содержащие мРНК, микроРНК, липиды и белки, могут быть включены в клетки -реципиенты и модифицировать их функции. Было показано, что при нормальном гематопоэзе включение MSC-EV в клетках CD34+ индуцирует активацию пути JAK-STAT через повышенные уровни фосфо-STAT5; Кроме того, было сообщено о значительном снижении апоптоза и более высокого колоний-образующегося блока гранулоцитов/макрофагов.

Цели этого исследования:

• изолировать МСК от BM пациентов с PMF и HDS. MSC будут инкубированы с/Out Ruxolitinib. EVS будет получена после MSC голода и ультрацентрифугирования и сохранена при -80 ° C
• Чтобы оценить эффект EV на HD-CD34+ или JAK2V617F+ SET2, путем оценки апоптотических и активационных путей, продукции АФК и клоногенной способности. В связи с этим подтверждающие эксперименты будут проведены с JAK2-мутированными CD34+ клетками от пациентов, получающих или нет руксолитиниба.
• Чтобы выполнить профиль экспрессии генов на клетках CD34+ и Set2 после инкубации с EVS.
• Чтобы исследовать EV BioCargoes, как QRT-PCR, так и протеомика будут выполняться на EV, полученных из MSC, до и после инкубации с руксолитинибом.

Ожидаемое воздействие будет включать в себя идентификацию модификаций в функциональной активности клеток CD34+ или SET2 после инкубации с PMF-MSC-EV по отношению к HD-MSC-EV, отражая влияние измененного микросреда на HPC. Исследователи также ожидают распознавания важных целей тяжести/прогрессирования заболевания путем оценки профиля экспрессии генов в клетках CD34+ или Set2, которые включают EV из разных источников.

Кроме того, может быть прояснена идентификация воздействия руксолитиниба на микроокружение PMF BM.

Это исследование может позволить действовать в отношении новых целей прогрессирования заболевания или поддержать будущее использование HD-EV в качестве ацеллельной терапии, которая способствует выживанию здоровых клеток CD34+ или действует против их клонального аналога.