Paper de las vesículas extracelulares derivadas de células del estroma mesenquimatoso de pacientes con mielofibrosis primaria en células CD34+

La mielofibrosis primaria (PMF) es una neoplasia mieloproliferativa crónica caracterizada por la proliferación clonal de células progenitoras CD34+. Una activación constitutiva de la vía JAK-STAT, debido a una ganancia adquirida de mutación de función, ya sea en los genes JAK2, MPL o CALR, juega un papel patogenético relevante. Además, un estado de inflamación crónica afecta el curso de la enfermedad. Actualmente, la terapia con el inhibidor de JAK ruxolitinib mejora los síntomas de la enfermedad, sin efectos en el clon de células patológicas; El trasplante de células progenitoras hematopoyéticas (HPC) es la única opción curativa. Los investigadores publicaron anteriormente que las células del estroma mesenquimatoso (MSC) de pacientes con PMF muestran anormalidades funcionales y genéticas (bajo potencial proliferativo, senescencia precoz, potencial de diferenciación reducido). Con respecto a ruxolitinib, se han descrito los efectos directos sobre las MSC, como la inhibición de la señalización de JAK-STAT, el crecimiento de los donantes sanos (HD) y PMF-MSC, y la disminución de la expresión génica relacionada con la fibrosis. También se ha informado que el ruxolitinib reduce la secreción de MSC de las citocinas inflamatorias MCP-1 e IL-6, lo que sugiere un papel de este fármaco en la modificación del microambiente de la médula ósea (BM). En PMF, como en otras neoplasias hematológicas, las MSC participan en la comunicación entre el microambiente y las células CD34+. Estudios recientes demostrados en otras patologías que las vesículas extracelulares derivadas de MSC (EV) y las MSC de los padres tienen efectos similares. De hecho, los EV, que contienen ARNm, microARN, lípidos y proteínas, se pueden incorporar a las células receptoras y modificar sus funciones. En la hematopoyesis normal, se ha demostrado que la incorporación de MSC-EV en las células CD34+ induce una activación de la vía JAK-STAT a través de niveles aumentados de fosfo-STAT5; Además, se ha informado una disminución significativa en la apoptosis y una mayor unidad de colonias formadoras de granulocitos/potencial clonogénico de macrófagos.

Los objetivos de este estudio son:

• Aislar MSC de BM de pacientes con PMF y HDS. Las MSC se incubarán con Ruxolitinib. Los EV se obtendrán después de la inanición de MSC y las ultracentrifugaciones, y se almacenarán a -80 ° C
• Evaluar los efectos EV en las células HD-CD34+ o JAK2V617F+ SET2 mediante la evaluación de vías apoptóticas y de activación, producción de ROS y capacidad clonogénica. A este respecto, los experimentos confirmatorios se realizarán con células CD34+ mutadas con JAK2 de pacientes que reciben o no ruxolitinib.
• Para realizar el perfil de expresión génica en las células CD34+ y SET2 después de la incubación con EV.
• Para investigar BIOCARGO DE EV, se realizarán tanto QRT-PCR como proteómica en EV derivados de MSC, antes y después de la incubación con ruxolitinib.

El impacto esperado incluirá la identificación de modificaciones en actividades funcionales de las células CD34+ o SET2 después de la incubación con PMF-MSC-EVS con respecto a HD-MSC-EVS, lo que refleja el efecto de un microambiente alterado en los HPC. Los investigadores también esperan el reconocimiento de objetivos importantes de gravedad/progresión de la enfermedad al evaluar el perfil de expresión génica en células CD34+ o SET2 que incorporan EV de diferentes fuentes.

Además, se puede aclarar la identificación de los efectos de ruxolitinib sobre el microambiente PMF BM.

Este estudio puede permitir actuar sobre nuevos objetivos de progresión de la enfermedad o apoyar el uso futuro de HD-EV como una terapia acelular que favorece la supervivencia de las células CD34+ sanas o actúa contra su contraparte clonal.