Roll af mesenchymal stromalcelle afledte ekstracellulære vesikler af primære myelofibrosispatienter på CD34+ celler

Primær myelofibrosis (PMF) er en kronisk myeloproliferativ neoplasma, der er kendetegnet ved den klonale spredning af CD34+ -komcellerceller. En konstitutiv aktivering af JAK-STAT-stien på grund af en erhvervet forstærkning af funktionsmutation enten i JAK2, MPL eller CALR-gener spiller en relevant patogenetisk rolle. Desuden påvirker en tilstand af kronisk betændelse sygdomsforløbet. I øjeblikket forbedrer terapien med JAK -hæmmeren ruxolitinib symptomerne på sygdommen uden effekter på den patologiske celleklon; Hæmatopoietisk stamcelle (HPC) transplantation er den eneste helbredende mulighed. Undersøgere offentliggjorde tidligere, at mesenchymale stromale celler (MSC'er) fra patienter med PMF -display -funktionelle og genetiske abnormiteter (lavproliferativt potentiale, fornem senescens, reducerede differentieringspotentialet). Med hensyn til ruxolitinib er direkte effekter på MSC'er beskrevet, såsom inhibering af JAK-STAT-signalering, væksten af ​​både sund donor (HD)-og PMF-MSC'er og faldet i fibrose-relateret genekspression. Ruxolitinib er også rapporteret at reducere MSC-sekretion af inflammatoriske cytokiner MCP-1 og IL-6, hvilket antyder en rolle af dette lægemiddel til at modificere knoglemarv (BM) mikromiljø. I PMF, som i andre hæmatologiske maligniteter, deltager MSC'er i kommunikationen mellem mikromiljø og CD34+ celler. Nylige undersøgelser demonstrerede i andre patologier, at MSC-afledte ekstracellulære vesikler (EV'er) og forældre MSC'er har lignende effekter. Faktisk kan EV'er, der indeholder mRNA, mikroRNA, lipider og proteiner, inkorporeres i modtagerceller og ændre deres funktioner. I normal hæmatopoiesis har MSC-EV-inkorporering i CD34+ -celler vist sig at inducere en aktivering af JAK-STAT-stien gennem øgede niveauer af phospho-STAT5; Derudover er der rapporteret om et signifikant fald i apoptose og en højere kolonidannende enhedsgranulocyt/makrofagklonogent potentiale.

Målene med denne undersøgelse er:

• at isolere MSC'er fra BM for PMF -patienter og HDS. MSC'er inkuberes med/out ruxolitinib. EV'er opnås efter MSC -sult og ultracentrifugeringer og opbevares ved -80 ° C
• For at vurdere EV-effekter på HD-CD34+ eller JAK2V617F+ SET2-celler ved evaluering af apoptotiske og aktiveringsveje, ROS-produktion og klonogen kapacitet. I denne forbindelse udføres bekræftende eksperimenter med JAK2-muterede CD34+ -celler fra patienter, der modtager eller ikke ruxolitinib.
• At udføre genekspressionsprofil på CD34+ og SET2 -celler efter inkubation med EV'er.
• For at undersøge EV-biokargoer udføres både QRT-PCR og proteomik på MSC-afledte EV'er før og efter inkubation med ruxolitinib.

Den forventede påvirkning vil omfatte identifikation af modifikationer i funktionelle aktiviteter af CD34+ eller SET2-celler efter inkubation med PMF-MSC-EV'er med hensyn til HD-MSC-EV'er, hvilket afspejler effekten af ​​et ændret mikromiljø på HPC'er. Undersøgere forventer også genkendelse af vigtige mål for sværhedsgrad/progression af sygdommen ved at vurdere genekspressionsprofilen i CD34+ eller SET2 -celler, der inkorporerer EV'er fra forskellige kilder.

Derudover kan identifikationen af ​​Ruxolitinib -effekterne på PMF BM -mikromiljø afklares.

Denne undersøgelse kan muligvis handle på nye mål for sygdomsprogression eller støtte den fremtidige anvendelse af HD-EV'er som en acellulær terapi, der favoriserer overlevelsen af ​​sunde CD34+ celler eller handlinger mod deres klonale modstykke.