Ruolo delle vescicole extracellulari derivate dalle cellule mesenchimali dei pazienti con mielofibrosi primaria su cellule CD34+

La mielofibrosi primaria (PMF) è una neoplasia mieloproliferativa cronica caratterizzata dalla proliferazione clonale delle cellule progenitrici CD34+. Un'attivazione costitutiva del percorso JAK-Stat, a causa di un guadagno acquisito di mutazione della funzione nei geni JAK2, MPL o CALR, svolge un ruolo patogenetico rilevante. Inoltre, uno stato di infiammazione cronica influisce sul corso della malattia. Attualmente, la terapia con l'inibitore JAK Ruxolitinib migliora i sintomi della malattia, senza effetti sul clone delle cellule patologiche; Il trapianto di cellule progenitrici ematopoietiche (HPC) è l'unica opzione curativa. Gli investigatori hanno precedentemente pubblicato che le cellule stromali mesenchimali (MSC) di pazienti con PMF mostrano anomalie funzionali e genetiche (basso potenziale proliferativo, senescenza precoce, ridotto potenziale di differenziazione). Per quanto riguarda il ruxolitinib, sono stati descritti effetti diretti sugli MSC, come l'inibizione della segnalazione JAK-STAT, la crescita di entrambi i donatori sani (HD)-e PMF-MSCS e la diminuzione dell'espressione genica correlata alla fibrosi. È stato anche riferito che Ruxolitinib riduce la secrezione di MSC delle citochine infiammatorie MCP-1 e IL-6, suggerendo un ruolo di questo farmaco nella modifica del microambiente del midollo osseo (BM). Nel PMF, come in altre neoplasie ematologiche, le MSC partecipano alla comunicazione tra microambiente e cellule CD34+. Recenti studi hanno dimostrato in altre patologie che le vescicole extracellulari derivate da MSC (EV) e le MSC parentali hanno effetti simili. In effetti, i veicoli elettrici, contenenti mRNA, microRNA, lipidi e proteine ​​possono essere incorporati nelle cellule riceventi e modificare le loro funzioni. Nell'ematopoiesi normale, è stato dimostrato che l'incorporazione di MSC-EV nelle cellule CD34+ induce un'attivazione della via JAK-STAT attraverso un aumento dei livelli di fosfo-stat5; Inoltre, è stata riportata una riduzione significativa dell'apoptosi e un potenziale clonogenico di granulociti/macrofagi per unità di formazione di colonie più elevata.

Gli obiettivi di questo studio sono:

• per isolare le MSC da BM di pazienti con PMF e HDS. Le MSC saranno incubate con/out ruxolitinib. I veicoli elettrici saranno ottenuti dopo la fame di MSC e le ultracentrifugazioni e conservate a -80 ° C
• Per valutare gli effetti EV sulle cellule HD-CD34+ o JAK2V617F+ SET2 mediante valutazione di percorsi apoptotici e di attivazione, produzione di ROS e capacità clonogena. A questo proposito, gli esperimenti di conferma verranno eseguiti con cellule CD34+ mutate da JAK2 da pazienti che hanno ricevuto o meno ruxolitinib.
• Per eseguire il profilo di espressione genica su cellule CD34+ e Set2 dopo l'incubazione con EV.
• Per studiare i biocargoi EV sia la QRT-PCR che la proteomica saranno eseguiti su EV derivati ​​da MSC, prima e dopo l'incubazione con ruxolitinib.

L'impatto atteso includerà l'identificazione delle modifiche nelle attività funzionali delle cellule CD34+ o SET2 a seguito di incubazione con PMF-MSC-EVS rispetto agli HD-MSC-EV, che riflettono l'effetto di un microambiente alterato su HPC. Gli investigatori si aspettano inoltre il riconoscimento di importanti obiettivi di gravità/progressione della malattia valutando il profilo di espressione genica nelle cellule CD34+ o SET2 che incorporano EV da diverse fonti.

Inoltre, può essere chiarita l'identificazione degli effetti Ruxolitinib sul microambiente BM PMF.

Questo studio può consentire di agire su nuovi obiettivi di progressione della malattia o di supportare l'uso futuro di HD-EV come terapia acellulare che favorisce la sopravvivenza di cellule CD34+ sane o atti contro la loro controparte clonale.