Rolle der mesenchymalen Stromazell -Zell -abgeleiteten extrazellulären Vesikel primärer Myelofibrosepatienten auf CD34+ -Zellen

Die primäre Myelofibrose (PMF) ist ein chronisches myeloproliferatives Neoplasma, das durch die klonale Proliferation von CD34+ -Preferitorzellen gekennzeichnet ist. Eine konstitutive Aktivierung des JAK-STAT-Weges aufgrund eines erworbenen Funktionsgewinns in JAK2-, MPL- oder CALR-Genen spielt eine relevante pathogenetische Rolle. Darüber hinaus beeinflusst ein Zustand chronischer Entzündung den Krankheitsverlauf. Derzeit verbessert die Therapie mit dem JAK -Inhibitor Ruxolitinib die Symptome der Krankheit, ohne Auswirkungen auf den pathologischen Zellklon; Die hämatopoetische Vorläuferzelltransplantation (HPC) ist die einzige kurative Option. Die Forscher veröffentlichten zuvor, dass mesenchymale Stromazellen (MSCs) von Patienten mit PMF funktionelle und genetische Anomalien aufweisen (niedriges proliferatives Potential, frühreifes Seneszenz, reduziertes Differenzierungspotential). In Bezug auf Ruxolitinib wurden direkte Auswirkungen auf MSCs beschrieben, wie die Hemmung der JAK-STAT-Signalübertragung, das Wachstum sowohl des gesunden Spenders (HD)-als auch des PMF-MSCs und der Abnahme der Genexpression von Fibrose. Es wurde auch berichtet, dass Ruxolitinib die MSC-Sekretion von entzündlichen Zytokinen MCP-1 und IL-6 verringert, was auf eine Rolle dieses Arzneimittels bei der Modifizierung der Mikroumgebung des Knochenmarks (BM) hinweist. In PMF beteiligen sich wie bei anderen hämatologischen Malignitäten MSCs an der Kommunikation zwischen Mikroumgebung und CD34+ -Zellen. Jüngste Studien zeigten bei anderen Pathologien, dass von MSC abgeleitete extrazelluläre Vesikel (EVs) und mSCs der Eltern ähnliche Effekte haben. Tatsächlich können EVs, die mRNA, microRNA, Lipide und Proteine ​​enthalten, in Empfängerzellen eingebaut und ihre Funktionen verändert werden. Bei normaler Hämatopoese wurde gezeigt, dass der MSC-EV-Einbau in CD34+ -Zellen eine Aktivierung des JAK-STAT-Weges durch erhöhte Phospho-STAT5-Spiegel induziert; Darüber hinaus wurde eine signifikante Abnahme der Apoptose und ein höheres koloniebildendes Granulozyten/Makrophagen-klonogenes Potential berichtet.

Die Ziele dieser Studie sind:

• MSCs von BM von PMF -Patienten und HDS zu isolieren. MSCs werden mit/out ruxolitinib inkubiert. EVs werden nach MSC -Hunger und Ultrazentrifugationen erhalten und bei -80 ° C gelagert
• Um die EV-Effekte auf HD-CD34+ oder JAK2V617F+ SET2-Zellen durch Bewertung von apoptotischen und Aktivierungswege, ROS-Produktion und klonogenen Kapazität zu bewerten. In dieser Hinsicht werden Bestätigungsversuche mit JAK2-mutierten CD34+ -Zellen von Patienten durchgeführt, die Ruxolitinib erhalten oder nicht.
• Um das Genexpressionsprofil auf CD34 +- und Set2 -Zellen nach Inkubation mit EVs auszuführen.
• Um die EV-Biokargo zu untersuchen, werden sowohl QRT-PCR als auch Proteomik vor und nach Inkubation mit Ruxolitinib durchgeführt.

Der erwartete Einfluss umfasst die Identifizierung von Modifikationen in funktionellen Aktivitäten von CD34+ oder SET2-Zellen nach Inkubation mit PMF-MSC-EVs in Bezug auf HD-MSC-EVs, was den Effekt einer veränderten Mikroumgebung auf HPCs widerspiegelt. Die Forscher erwarten auch die Erkennung wichtiger Ziele des Schweregrads/des Fortschreitens der Krankheit, indem das Genexpressionsprofil in CD34 +- oder SET2 -Zellen bewertet wird, die EVs aus verschiedenen Quellen einbeziehen.

Darüber hinaus kann die Identifizierung der Ruxolitinib -Effekte auf PMF -BM -Mikroumgebung geklärt werden.

Diese Studie kann es ermöglichen, auf neue Ziele des Fortschreitens der Krankheit zu reagieren oder die zukünftige Verwendung von HD-EVs als azelluläre Therapie zu unterstützen, die das Überleben gesunder CD34+ -Zellen begünstigt oder gegen ihr klonales Gegenstück wirkt.